基于单克隆抗体和金纳米颗粒的侧向流免疫层析试纸条的开发与验证——用于水产品中创伤弧菌的快速检测

《Food Analytical Methods》：Development and Validation of a Monoclonal Antibody-Based Lateral Flow Immunochromatographic Assay Using Gold Nanoparticles for Rapid Detection of Vibrio vulnificus in Seafood

　　

摘要

创伤弧菌（Vibrio vulnificus）是一种与海产品传播感染相关的高毒力海洋细菌，构成重大公共卫生隐患。常规检测方法往往费时费力，凸显了对简单、快速且可靠的检测方法的迫切需求。本研究开发了一种基于单克隆抗体的金纳米颗粒侧向流免疫层析法（LFIA），用于快速可视化检测创伤弧菌。本研究制备并表征了两种杂交瘤来源的单克隆抗体——VV-213和VV-301，二者表现出不同的免疫反应模式。将这两种抗体整合到夹心法LFIA中，其中VV-213作为金标记的检测抗体，VV-301固定在检测线上作为捕获抗体。该方法在20株创伤弧菌分离株中表现出100%的特异性，对其他受试弧菌物种或非弧菌革兰阴性菌均未观察到交叉反应。在应用缓冲液中直接检测时，分析检测限为6.25?×?10⁶?CFU/mL。在人工污染的牡蛎匀浆中评估了该LFIA的可行性，经过6小时预富集后，检测限达到10?CFU/mL，与相同条件下的PCR结果相当。值得注意的是，该LFIA在15分钟内即可获得肉眼可判读的结果，且无需专用设备，从而提高了其现场适用性。此外，该方法在加速老化试验后仍能保持功能性，表明其在常温条件下的预估保质期至少为2年。总体而言，这些结果表明所开发的LFIA是一种简单实用的工具，可用于快速筛查海产品中的创伤弧菌，并可能支持常规海产品安全监测工作。

图解摘要

创伤弧菌（Vibrio vulnificus）是一种与海产品传播感染相关的高毒力海洋细菌，构成重大公共卫生隐患。常规检测方法往往费时费力，凸显了对简单、快速且可靠的检测方法的迫切需求。本研究开发了一种基于单克隆抗体的金纳米颗粒侧向流免疫层析法（LFIA），用于快速可视化检测创伤弧菌。本研究制备并表征了两种杂交瘤来源的单克隆抗体——VV-213和VV-301，二者表现出不同的免疫反应模式。将这两种抗体整合到夹心法LFIA中，其中VV-213作为金标记的检测抗体，VV-301固定在检测线上作为捕获抗体。该方法在20株创伤弧菌分离株中表现出100%的特异性，对其他受试弧菌物种或非弧菌革兰阴性菌均未观察到交叉反应。在应用缓冲液中直接检测时，分析检测限为6.25?×?10⁶?CFU/mL。在人工污染的牡蛎匀浆中评估了该LFIA的可行性，经过6小时预富集后，检测限达到10?CFU/mL，与相同条件下的PCR结果相当。值得注意的是，该LFIA在15分钟内即可获得肉眼可判读的结果，且无需专用设备，从而提高了其现场适用性。此外，该方法在加速老化试验后仍能保持功能性，表明其在常温条件下的预估保质期至少为2年。总体而言，这些结果表明所开发的LFIA是一种简单实用的工具，可用于快速筛查海产品中的创伤弧菌，并可能支持常规海产品安全监测工作。

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