SPI1通过增强NRSF对HCN1的抑制作用以及诱发内质网应激，进一步加重神经源性膀胱功能障碍

《In Vitro Cellular & Developmental Biology - Animal》：SPI1 exacerbates neurogenic bladder dysfunction by enhancing NRSF-mediated suppression of HCN1 and inducing endoplasmic reticulum stress

　　

摘要

神经源性膀胱（Neurogenic Bladder, NB）严重影响了患者的生活质量。本研究旨在探讨与NB相关的膀胱功能障碍的分子机制。通过脊髓损伤（Spinal Cord Injury, SCI）建立了NB的大鼠模型。通过尿动力学检测和组织切片的苏木精-伊红（Hematoxylin–Eosin）染色来评估膀胱功能。利用免疫组化、Western blot和逆转录定量聚合酶链反应（Reverse Transcription Quantitative Polymerase Chain Reaction）技术检测了膀胱组织或细胞中SPI1、HCN1、神经元限制性沉默因子（Neuronal Restrictive Silencing Factor, NRSF）以及内质网（Endoplasmic Reticulum, ER）应激相关蛋白的表达水平。细胞活力通过Cell Counting Kit-8试剂盒进行测量。凋亡情况通过末端脱氧核苷酸转移酶dUTP缺口末端标记（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase dUTP Nick End Labeling, TUNEL）染色和流式细胞术进行评估。利用JASPAR数据库预测SPI1与NRSF启动子之间的潜在结合位点，并通过双荧光素酶报告基因和染色质免疫沉淀（Chromatin Immunoprecipitation）实验进行验证。通过使用抑制剂4-苯基丁酸（4-phenylbutyric acid）或诱导剂放线菌素D（Tunicamycin）研究了ER应激在NB中的作用。NB大鼠的膀胱组织显示凋亡增加和ER应激相关蛋白显著上调。此外，SPI1和NRSF的表达水平升高，而超极化激活的环核苷酸门控通道1（Hyperpolarization-Activated Cyclic Nucleotide-Gated Channel 1, HCN1）的表达降低。进一步分析表明，SPI1与NRSF启动子结合并上调其表达，从而增强了对HCN1的抑制作用。敲低SPI1显著改善了膀胱功能障碍，减轻了ER应激，并抑制了凋亡。这些效应可通过过表达NRSF逆转。研究表明，SPI1通过上调NRSF从而增强对HCN1的抑制并引发ER应激，从而导致膀胱功能障碍。这些发现为NB的干预和治疗提供了有前景的分子靶点和信号通路。