沙特阿拉伯队列中骨髓增殖性肿瘤的JAK2V617F突变与JAK2 46/1胚系单倍型特征：基于病例的分析

《Frontiers in Oncology》：Characterization of JAK2V617F and the JAK2 46/1 germline haplotype in myeloproliferative neoplasms in a Saudi Arabian cohort: a case-based analysis

　　

背景：JAK2V617F是与骨髓增殖性肿瘤（myeloproliferative neoplasms，MPNs）相关的重要突变。胚系JAK2 46/1单倍型是多种族中已确立的MPN低外显率易感因素。本研究旨在表征沙特阿拉伯MPN队列中JAK2V617F突变患病率及JAK2 46/1单倍型分布。
方法：研究人员在沙特阿拉伯利雅得法赫德国王医疗城开展了一项回顾性队列研究。2018年1月至2019年12月期间共纳入130名参与者（98名MPN患者和32名非MPN对照）。JAK2V617F突变状态通过等位基因特异性TaqMan定量PCR（qPCR）确定。使用经验证的TaqMan SNP检测方法对rs12343867和rs10974900进行基因分型，以确定单倍型携带状态。
结果：在13.1%的患者（n=17；9名女性，8名男性）中检测到JAK2V617F，突变频率无统计学显著的性别差异。在rs12343867位点，46/1单倍型总携带频率为80.7%（TT纯合：51.5%；CT杂合：29.2%）。按MPN亚型分类，TT纯合在ET中最常见（56.3%）。按MPN亚型分类，CC基因型在ET（57.8%）、PV（50.0%）、PMF（75.0%）和非MPN对照（54.8%）中占主导。
结论：这是首个在沙特阿拉伯MPN队列中同时表征JAK2V617F和胚系JAK2 46/1单倍型的研究。升高的单倍型携带频率支持该人群对MPN存在遗传易感性，并将JAK2 46/1单倍型定位为风险分层的候选补充生物标志物。有必要开展纳入全面驱动突变谱分析和人群匹配健康对照的前瞻性多中心研究。

骨髓增殖性肿瘤（myeloproliferative neoplasms，MPNs）是一组克隆性造血干细胞疾病，主要包括真性红细胞增多症（polycythemia vera，PV）、原发性血小板增多症（essential thrombocythemia，ET）和原发性骨髓纤维化（primary myelofibrosis，PMF）。MPN以造血增殖失调、促炎性骨髓微环境以及向急性髓系白血病转化的高风险为特征。尽管MPN既往被视为获得性克隆性疾病，但近二十年的研究提示体细胞突变与遗传因素之间存在重要相互作用，共同影响疾病发生、表型及进展。JAK2V617F是MPN中最常见的驱动突变，在PV中检出率约95%，在ET和PMF中为50%–60%，但该突变也偶见于健康个体，提示其单独不足以解释MPN发病。因此，低外显率胚系易感因素日益受到关注。JAK2 46/1单倍型（亦称为GGCC单倍型）已被证实是多种族中MPN的遗传易感因素，但中东人群的数据有限。沙特阿拉伯具有独特的遗传结构和近亲婚配模式，其JAK2位点的等位基因频率可能具有独特性，然而该人群在MPN遗传学研究中尚缺乏表征。基于此，本研究旨在沙特MPN队列中同时表征JAK2V617F突变患病率及JAK2 46/1单倍型分布，以评估该单倍型在沙特患者中的易感作用。

研究人员在沙特阿拉伯利雅得法赫德国王医疗城开展了一项回顾性队列研究，于2018年1月至2019年12月纳入130名参与者，包括98例MPN患者（ET 64例、PV 30例、PMF 4例）和32例非MPN对照。通过等位基因特异性TaqMan定量PCR（qPCR）检测JAK2V617F突变，并使用TaqMan SNP基因分型方法对rs12343867和rs10974900两个标签单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）进行分型，以确定46/1单倍型携带状态。此外，对20例JAK2V617F阴性和46/1单倍型阴性患者中的16例进行了JAK2外显子3–24的靶向Sanger测序，以寻找替代的易感变异。统计上采用卡方检验或Fisher精确检验评估单倍型状态、突变与MPN亚型之间的关联。

研究结果分四部分阐述。第一，基线特征与血液学参数：通过比较各MPN亚型与非MPN对照的完整血细胞计数（complete blood count，CBC）参数，发现ET患者平均血小板计数升高（480.42 × 10⁹/L），PV患者平均红细胞计数（5.87 × 10¹²/L）和血红蛋白（16.20 g/dL）升高，PMF患者平均血小板（644.50 × 10⁹/L）和白细胞（12.63 × 10⁹/L）计数均升高，非MPN对照的平均白细胞计数（17.49 × 10⁹/L）亦升高，提示各亚型具有特征性的外周血改变。第二，JAK2V617F突变频率：在130例样本中检出17例（13.1%）JAK2V617F阳性，其中女性9例（52.9%）、男性8例（47.1%），性别间突变频率差异无统计学显著性。第三，JAK2 46/1单倍型基因分型——SNP rs12343867：全部130例样本成功分型，TT纯合基因型最常见（51.5%），CT杂合为29.2%，CC非携带为19.2%，T等位基因携带总频率达80.7%。在JAK2V617F阳性患者中，CC非携带基因型比例（47.1%）显著高于阴性组（15.0%），提示T等位基因携带状态与体细胞JAK2V617F获得之间可能存在反向关系。按MPN亚型分析，ET中TT纯合比例最高（56.3%），非MPN对照组也以TT纯合为主（62.5%）。第四，JAK2 46/1单倍型基因分型——SNP rs10974900：129例样本成功分型，CC纯合基因型最常见（55.8%），CT杂合为31.0%，TT纯合为13.2%，该位点的单倍型携带总频率为44.2%。在JAK2V617F阳性患者中，82.4%为CC纯合，17.6%为CT杂合，未观察到TT纯合基因型；而在突变阴性组中TT纯合占15.2%，提示rs10974900的T等位基因可能与JAK2V617F阳性状态不兼容或被强烈负向选择。各MPN亚型和对照中均以CC基因型为主。

讨论部分总结了以下要点：本研究JAK2V617F检出率仅为13.1%，远低于既往报道的PV 95%以上、ET和PMF 50%–60%的水平，这可能与队列中ET占比较高以及JAK2阴性患者中可能存在CALR或MPL突变有关，但本研究未对这些替代驱动突变进行检测，是未来工作的重要方向。关于46/1单倍型，rs12343867位点的携带频率（80.7%）显著高于欧洲健康人群的24%和欧洲MPN患者的40%–80%，支持该单倍型的易感作用在不同种族中普遍存在。这种关联更符合“肥沃土壤”假说，即遗传单倍型为体细胞突变的发生或克隆扩增提供了有利背景，而非“高突变”假说；但观察性研究无法验证机制。rs10974900的CC基因型在突变阳性患者中富集，且TT纯合缺失，需要进一步单倍型分析确认共分离。临床意义方面，高频率的46/1单倍型提示胚系易感检测可能有助于风险分层和家族成员监测；该单倍型还与血栓、炎症等并发症相关，可能影响治疗决策。研究局限性包括样本量小、缺乏年龄和性别匹配的健康沙特对照、未检测CALR/MPL突变以及单中心设计。

研究结论部分可翻译为：总之，本研究首次描述了沙特阿拉伯MPN队列中JAK2V617F突变和胚系JAK2 46/1单倍型（rs12343867）的特征。相对较低的JAK2V617F阳性率可能反映了队列中ET占主导以及需要进一步分子表征的JAK2阴性疾病负担较高。高46/1单倍型携带频率与已发表的其他全球人群数据一致，支持其在沙特患者MPN发病中作为胚系易感因素的作用。这些发现提出JAK2 46/1单倍型可作为沙特阿拉伯MPN风险分层的候选补充生物标志物。需要更大样本、驱动突变筛查（包括CALR和MPL）、健康对照比较以及等位基因负荷量化的前瞻性多中心研究，以实现更全面的理解。