《Journal of NeuroVirology》：HIV cure: from early therapies to cutting-edge strategies
人类免疫缺陷病毒（HIV）数十年来持续挑战人类健康，其悄然建立的潜伏病毒库（latent reservoirs）即使是最强效的抗逆转录病毒疗法（antiretroviral therapy, ART）也难以清除。尽管ART已将HIV从致命性疾病转变为可控的慢性疾病，但病毒的隐匿性持续存在仍不断加剧全球流行态势。本综述回顾了HIV治疗的发展历程，梳理了从传统ART到创新性基因编辑与免疫治疗策略的演进脉络。这一历程的核心是CRISPR-Cas系统，该分子"手术刀"能够实现整合前病毒DNA（proviral DNA）的精确切除、破坏CCR5等入侵共受体（entry co-receptors）、调控宿主限制因子（host restriction factors）以增强固有免疫防御。临床前研究显示，CRISPR干预能够减少病毒库、阻止病毒再激活并恢复抗病毒免疫，为超越终身ART的未来提供了可能。挑战依然存在，尤其是在感染细胞中的高效递送以及减少脱靶效应方面，但载体设计与计算预测工具的进步正在逐步克服这些障碍。本综述将实验发现与转化医学视角相结合，凸显了CRISPR在提供持久、可扩展且具成本效益的HIV控制方面的潜力，特别是在资源匮乏地区。最终，本综述强调了一个充满希望的愿景：精确基因编辑有望将HIV治疗从终身抑制转变为通向功能性治愈（functional cure）的路径，从而改变这一病毒的故事及其所触及的生命。
HIV的挑战与临床阶段
人类免疫缺陷病毒1型（human immunodeficiency virus type 1, HIV-1）是现代史上最重要的传染病之一，自大流行开始以来估计已感染8400万人，并在全球造成约4000万人死亡。该病毒起源于黑猩猩体内的猴免疫缺陷病毒（simian immunodeficiency virus, SIV），后者跨物种传播至中非地区的人类，进而产生了驱动全球流行的高致病性HIV-1毒株。截至2024年底，约有4080万人携带HIV，其中包括3940万成人（15岁及以上）和140万儿童（0-14岁）。尽管撒哈拉以南非洲仍是受影响最严重的地区，但最新数据显示东欧、中亚以及中东和北非地区的发病率正在上升。
HIV-1通过含病毒的体液（如血液、精液、阴道分泌物和母乳）进入他人血液而传播。主要传播途径包括性接触、共用受污染针具以及母婴垂直传播。约80%的青少年和成人感染通过阴道或肛门性交发生。进入体内后，病毒靶向免疫系统细胞，尤其是CD4?T淋巴细胞，同时也感染巨噬细胞和脑内小胶质细胞。病毒与CD4受体及趋化因子共受体CCR5或CXCR4结合，进入细胞并启动复制。
感染的最早阶段即急性HIV感染，通常在暴露后一至两个月出现。部分个体出现流感样症状，如发热、寒战、乏力、咽痛、肌痛、皮疹、盗汗、淋巴结肿大和口腔溃疡，而另一些人则可完全无症状。这些初期表现通常在数天或数周内消退，但病毒持续复制。随后进入第二阶段即慢性HIV感染或临床潜伏期，在此期间患者可能多年感觉完全健康，但仍携带并传播病毒。若不治疗，HIV逐渐侵蚀免疫系统，直至到达第三阶段即最严重的获得性免疫缺陷综合征（acquired immunodeficiency syndrome, AIDS），其定义为CD4?T细胞计数低于200个/mm3或出现AIDS界定性疾病。此时，脆弱免疫系统无法再抵御结核病、肺孢子菌肺炎或念珠菌病等机会性感染，卡波西肉瘤和非霍奇金淋巴瘤等癌症风险亦急剧升高。
未经治疗的成人从感染进展至AIDS通常需2-10年，但婴儿的疾病进展远为迅速，若不治疗，半数可能在24个月内死亡。即使在AIDS发生之前，长期HIV感染也会引起慢性免疫激活和炎症，导致严重健康问题，包括心血管疾病、骨质疏松、HIV相关性神经认知障碍（HIV-associated neurocognitive disorder, HAND）及非AIDS相关性癌症。
HIV生命周期
HIV-1首先寻找其主要宿主：活化的CD4?T细胞，但巨噬细胞、树突状细胞、小胶质细胞甚至干细胞也可携带病毒并构成长期病毒库。病毒生命周期可分为两个阶段。早期阶段中，病毒粒子须迅速附着于细胞表面，因游离病毒体在血液循环中仅能存活20-30分钟。病毒gp120糖蛋白与CD4受体结合，经细微构象变化后探测共受体CCR5或CXCR4，后者最终决定病毒嗜性及疾病进展。然而，CCR5和CXCR4对HIV-1传播和疾病进展的贡献并不相同。CCR5嗜性（R5）病毒在传播及早期和慢性感染中占主导地位，构成HIV-1传播的大多数。相比之下，CXCR4利用型（X4）或双嗜性（R5×4）变异株在B亚型感染中特征尤为明确，常在疾病后期出现，与更广泛的细胞嗜性和加速的CD4?T细胞下降相关。
一旦建立稳定相互作用，gp41驱动膜融合，将病毒RNA和蛋白质释放入胞质。在此，逆转录酶将单链RNA转变为线性双链DNA，该过程高度易错（约每10000个核苷酸发生1个突变），产生异质性病毒群体，促进快速适应、耐药性和免疫逃逸。膜融合后，包裹病毒RNA基因组、逆转录酶和整合酶的HIV-1衣壳释放入胞质。并非如传统观点认为的那样完全在胞质中解聚，现有证据表明衣壳在胞质运输过程中基本保持完整，并与核孔复合体相互作用以促进入核。逆转录在衣壳内启动并可在核输入后继续，病毒DNA合成和衣壳脱壳在整合前于核内完成。这一修正后的认识确立了衣壳作为逆转录、核运输和整合的关键调控因子，也是重要的治疗靶点。Lenacapavir是一种长效衣壳抑制剂，通过结合衣壳蛋白亚基间的界面，破坏病毒生命周期中多个依赖衣壳的阶段，包括衣壳介导的核摄取、病毒组装和释放以及衣壳核心形成。整合是下一个决定性步骤：病毒借助整合酶将HIV DNA插入宿主基因组，将细胞悄然转化为终身携带者。
HIV-1生命周期的晚期阶段由前病毒转录启动。细胞转录因子（包括NF-κB和NFAT）与病毒Tat蛋白协同增强病毒RNA合成，可变剪接产生完整的结构蛋白、酶蛋白和辅助蛋白以完成病毒体组装。病毒组分在浆膜处汇聚，Gag和Gag-Pol在多脂筏中多聚化，招募Env蛋白并包装两份基因组RNA。出芽过程中，Gag p6蛋白的晚期结构域与宿主Tsg101蛋白协作，帮助新形成的HIV颗粒从感染细胞上脱落进入循环。释放后，未成熟病毒体在病毒蛋白酶作用下经历最终转化，重塑为特征性的锥形核心，成为完全具有感染性的病毒体。
HIV治疗策略的演变
迄今为止，多种HIV治疗策略已在不同研究阶段得到开发和测试，从体外研究到临床试验。这些方法大致可分为五大类。第一类包括早期治疗药物如齐多夫定（azidothymidine, AZT），即第一种逆转录酶抑制剂，为HIV治疗带来了最初的希望。第二类涵盖抗逆转录病毒疗法（ART），其有效抑制病毒复制并已成为HIV管理的基石。第三类策略涉及CCR5缺陷造血细胞移植，旨在阻断病毒入侵并重建免疫功能，已在少数患者中提供了首个治愈证据。第四类聚焦于靶向宿主细胞及支持HIV复制条件的免疫学方法。第五类包括基因干预策略，如CRISPR/Cas9等基因编辑技术，旨在修饰病毒和宿主因子以实现持久甚至治愈性结局。
抗逆转录病毒疗法（ART）（靶向HIV复制）
HIV治疗始于1980年代中期，AZT是第一种延缓病毒复制的药物。AZT于1987年获FDA批准，作为一种核苷类逆转录酶抑制剂（nucleoside reverse transcriptase inhibitor, NRTI），阻断HIV将RNA逆转录为DNA。初期患者的感染减少、CD4计数改善，对这一既往致命的疾病重新燃起希望。然而，AZT单药治疗迅速面临局限：病毒产生耐药性，且高剂量常导致严重贫血和骨髓毒性。
1990年代初，地达诺辛、司他夫定和拉米夫定等更多NRTI扩展了治疗选择。双药联合延长了病毒抑制时间，但仍无法阻止耐药产生，凸显了更强效策略的必要性。1990年代中期，蛋白酶抑制剂（protease inhibitor, PI）和高效抗逆转录病毒疗法（highly active antiretroviral therapy, HAART）问世，通常以两种NRTI联合一种PI或非核苷类逆转录酶抑制剂（non-nucleoside reverse transcriptase inhibitor, NNRTI）至少三种药物靶向HIV的多个环节，大幅降低病毒载量、恢复免疫功能，将HIV转变为可控的慢性疾病。
联合抗逆转录病毒疗法（combination antiretroviral therapy, cART）在历史上亦称HAART，通过组合作用于HIV生命周期不同阶段的抗逆转录病毒药物而建立。该策略实现持久病毒抑制、限制耐药产生、恢复免疫功能并显著降低HIV相关发病率和死亡率。现代cART包含六大主要药物类别：NRTI、NNRTI、整合酶链转移抑制剂（integrase strand transfer inhibitor, InSTI）、蛋白酶抑制剂、融合抑制剂和共受体拮抗剂，各通过不同机制发挥作用。NRTI因缺乏形成磷酸二酯键所需的3′-羟基而终止病毒DNA延伸；NNRTI结合逆转录酶附近的疏水口袋，诱导构象变化阻断其活性；InSTI通过在整合酶活性位点螯合镁离子阻止病毒DNA整合；PI阻断多蛋白裂解从而终止病毒体成熟；融合抑制剂如恩夫韦肽则破坏gp41介导的膜融合。
尽管cART仍是HIV治疗的基石，但抑制病毒复制并不能清除携带整合前病毒DNA的细胞。静息记忆CD4?T细胞构成特征最为明确的持续病毒库，但越来越多证据表明，髓系来源细胞（尤其是长寿命的组织驻留巨噬细胞和小胶质细胞）在抑制性cART期间也可携带持续性HIV。这些细胞病毒库分布于多个解剖部位，是HIV根除的主要障碍。因此，停用cART通常导致病毒反弹，需要终身治疗。此外，cART还受药物毒性、高成本和耐药HIV毒株出现的制约。更长期的cART暴露与多病共存增加相关，包括血脂异常、高血压、骨质疏松及其他年龄相关疾病。心血管疾病日益常见，由传统危险因素和治疗相关毒性共同驱动。启动cART（尤其含NRTI、NNRTI或较老蛋白酶抑制剂的方案）常升高甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平，导致HIV相关性血脂异常；荟萃分析显示高甘油三酯血症风险增加两倍。衰老通过慢性炎症进一步加重心脏和肾脏并发症。cART可降低神经认知损害（neurocognitive impairment, NCI），但心律失常、糖尿病、肾功能衰竭、甲状腺功能减退、淋巴瘤、类风湿性关节炎、抑郁和体重减轻等合并症仍对NCI有显著影响。鉴于这些局限，当前研究聚焦于在抑制病毒复制的同时消除或功能性控制潜伏病毒库的策略，为潜在治愈提供希望。
CCR5Δ32异基因造血干细胞移植（CCR5Δ32 HSCT）（靶向HIV入侵）
异基因造血干细胞移植（allogeneic hematopoietic stem cell transplantation, HSCT）已成为HIV治疗的开创性策略，尤其适用于同时需要移植治疗血液系统恶性肿瘤的个体。该方法以供者来源的干细胞替代宿主免疫系统，当供者携带纯合CCR5Δ32突变时，所产生的免疫细胞缺乏CCR5受体，而CCR5是HIV进入CD4?T细胞和巨噬细胞的主要受体。由此病毒入侵被阻断，产生对CCR5嗜性HIV毒株的固有抵抗力，从而实现功能性甚至治愈性结局。著名案例包括柏林患者Timothy Ray Brown，他因急性髓系白血病接受两次来自CCR5Δ32纯合供者的异基因HSCT，在无ART情况下保持HIV不可检测超过十年。伦敦患者Adam Castillejo在接受CCR5Δ32供者HSCT治疗难治性霍奇金淋巴瘤后实现持续HIV缓解，病毒载量保持不可检测超过四年。杜塞尔多夫患者Marc Franke和希望之城患者Paul Edmonds也均实现了移植后的持久HIV抑制。纽约患者则接受了含CCR5Δ32脐血单位的混合单倍脐带血移植，实现了长期不可检测的HIV RNA。
尽管HSCT在实现HIV缓解方面取得显著成功，但该方法存在相当大的局限。由于需要强烈的预处理方案（包括化疗和全身照射），该手术具有较高的发病率和死亡率风险，可导致严重血细胞减少、器官毒性和机会性感染。移植物抗宿主病（graft-versus-host disease, GvHD）即使程度轻微，也构成额外风险，需要长期免疫抑制治疗，进一步增加感染和并发症风险。此外，该手术在操作和伦理上均具挑战性，携带纯合CCR5Δ32突变的合适供者极为罕见，尤其在非白种人群中的可用性更低，限制了广泛应用。HSCT还价格昂贵且具侵入性，不适合作为HIV感染者的普适性治愈策略。这些局限凸显了对更安全、更广泛适用方法的迫切需求，以保留现有策略所证明的有益临床概念，同时规避相关风险。
HIV治疗的免疫学方法（靶向支持HIV的细胞）
免疫学方法利用和调节宿主免疫系统以实现对HIV的控制或根除，核心聚焦于T细胞、NK细胞和B细胞功能。这些策略的基础在于细胞毒性T细胞应答：HIV特异性CD8?T细胞识别感染CD4?T细胞表面呈递的病毒肽段，通过穿孔素和颗粒酶诱导凋亡。这些细胞还分泌IFN-γ、TNF-α和CCL4-5等抗病毒细胞因子，通过非细胞裂解机制抑制病毒复制，同时分化为长寿命记忆T细胞以确保病毒再激活时的快速应答。
为增强这些天然防御，IL-15超级激动剂N-803等细胞因子疗法可促进CD8?T细胞和NK细胞增殖、促进其向淋巴组织迁移，并适度逆转潜伏，使免疫细胞能够识别和清除病毒库细胞。"休克与击杀"（shock-and-kill）策略利用潜伏逆转剂（latency-reversing agent, LRA）唤醒休眠HIV，使感染细胞暴露于细胞毒性T细胞或NK细胞而被清除，从而减少潜伏病毒库。在天然应答不足的情况下，T细胞工程策略（包括CAR-T细胞、HIV特异性T细胞体外扩增以及γδ T细胞疗法）可增强细胞毒性、靶向特异性和持久性，为功能性或治愈性疗法提供路径。PD-1和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4（cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4, CTLA-4）阻断剂等免疫检查点抑制剂可使耗竭T细胞恢复活力、改善细胞因子产生，并与其他免疫疗法协同作用，但临床应用受限于毒性问题。补充这些策略的是治疗性疫苗，包括DNA和蛋白平台，旨在引导免疫系统更有效地靶向HIV。
在T细胞中心策略之外，体液免疫应答提供额外防线。HIV感染者中天然产生的抗体通常较弱、延迟或具有毒株特异性。然而，广谱中和抗体（broadly neutralizing antibody, bNAb）能够中和多种病毒株，通过Fc介导的效应功能（如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性作用（antibody-dependent cellular cytotoxicity, ADCC））招募NK细胞，并增强HIV特异性T细胞应答。bNAb单独或联合治疗性给药已延缓病毒反弹、增强免疫控制，部分临床前模型中实现持久抑制。双特异性和三特异性构建体、长效制剂以及载体介导递送策略等抗体工程进展正在探索中。
免疫学策略仍受关键科学挑战制约。例如，LRA仅能再激活部分病毒库细胞，大量潜伏池保持完整。同时，慢性抗原暴露导致CD8?T细胞、NK细胞和B细胞耗竭，削弱其清除能力。更为复杂的是，HIV的巨大多样性使其能够迅速逃避免疫压力。尽管检查点阻断或工程化T细胞等干预可恢复或重定向免疫应答，但同样存在免疫失调风险。综上所述，这些局限表明单纯免疫方法不足以根除HIV，必须与补充性策略联合，不仅要针对感染细胞，还要从病毒源头及其在宿主组织中的持续存在部位加以处理。
CRISPR-Cas9的机制：从细菌免疫到基因组编辑
细菌中存在针对病毒感染的系统性防御机制。当病毒攻击细菌细胞时，细菌将病毒DNA片段（称为间隔序列）存储于自身基因组中。这些间隔序列充当分子记忆，通常位于称为成簇规律间隔短回文重复序列（clustered regularly interspaced short palindromic repeats, CRISPR）的特化DNA区域内，伴随编码CRISPR相关（CRISPR-associated, Cas）蛋白的基因。若同种病毒再次攻击，细菌利用这一记忆转录CRISPR RNA（crRNA）。crRNA与反式激活CRISPR RNA（trans-activating CRISPR RNA, tracrRNA）结合，后者由细菌基因组中CRISPR-Cas位点邻近区域编码。病毒感染时两种RNA均被表达，tracrRNA与前体crRNA（pre-crRNA）碱基配对促使其成熟。成熟crRNA-tracrRNA复合体形成分子向导，引导Cas蛋白识别入侵者基因组中的互补DNA序列。
科学家模拟这一天然系统开发了CRISPR-Cas9技术。在工程化版本中，单个向导RNA（single guide RNA, gRNA）将间隔序列（相当于crRNA）和支架序列（相当于tracrRNA）合成为一条分子。Cas9蛋白与gRNA结合形成核糖核蛋白（ribonucleoprotein, RNP）复合体。间隔序列引导RNP到达靶DNA，使Cas9在目标位置进行精确切割。靶标识别不仅需要序列互补性，还要求靶位点下游非靶链上存在短的前间隔序列邻近基序（protospacer adjacent motif, PAM）。PAM识别触发局部DNA解旋，使向导RNA沿5′→3′方向与靶链配对。这一相互作用诱导Cas9构象变化，激活其两个核酸酶结构域：HNH（切割靶链）和RuvC（切割非靶链），在PAM上游三个核苷酸处产生位点特异性双链断裂（double-strand break, DSB）。根据核酸酶结构域状态的不同，Cas9可作为形成DSB的核酸酶、仅一个结构域失活时的单链"切口酶"，或两个结构域均失活时作为RNA引导的DNA结合蛋白，作为将融合蛋白附着并递送至特定基因组位点的平台。
Cas9引入靶向DSB后，细胞的天然修复系统被激活。哺乳动物细胞中最常见的修复途径是末端连接，它重新连接断裂的DNA末端但常引入小错误，如数个核苷酸的添加或缺失。这些称为插入或缺失（indel）的小变化可破坏基因编码序列并有效将其关闭。当两个切割位点靠近时，其间的片段可被完全移除。或者，若提供带有匹配序列的修复模板，细胞可利用同源定向修复（homology-directed repair, HDR）将所需序列精确拷贝至基因组中，实现精确插入、校正或替换。由于末端连接比HDR更活跃，大多数基于Cas9的编辑导致基因敲除，而反复的切割-修复循环可导致更大片段缺失，从而阻止Cas9的进一步识别。
CRISPR/Cas9基因编辑策略在HIV治疗中的故事：从入侵到整合基因组靶向HIV
CRISPR/Cas9对抗HIV的旅程始于十多年前。2013年，Ebina及其同事将CRISPR/Cas9靶向HIV-1长末端重复序列（long terminal repeat, LTR），证明序列特异性基因组编辑可抑制感染细胞中的前病毒表达。该研究确立了直接靶向整合HIV-1前病毒DNA的可行性。
CRISPR的核心优势在于其适应性。与锌指核酸酶（zinc-finger nuclease, ZFN）或TALEN等需要复杂蛋白重新设计的旧式核酸酶不同，CRISPR仅需一条短gRNA即可将活性重定向至新序列。这种灵活性使其能够以同等便利靶向病毒基因组、宿主共受体或细胞限制因子。CRISPR已发展出三大治疗策略："保护"（Protect）、"切除/修饰"（Excise/Modify）和"清除"（Clearance）。
第一波研究聚焦于直接切除前病毒。通过引导Cas9靶向HIV-1基因组内保守位点（尤其是前病毒两侧LTR的U3区），研究人员在感染T细胞和小胶质细胞中实现了整合病毒DNA的完全移除。多重gRNA扩展了这一方法，可切除长达9kb的片段并显著减少病毒逃逸突变。Kaminski等通过将Cas9活性与HIV自身Tat蛋白连接，创造了病毒触发自身毁灭的反馈回路。
这一工作很快推进至体内。利用腺相关病毒（adeno-associated virus, AAV）载体，CRISPR组分被递送至携带整合HIV序列的转基因小鼠。Cas9/gRNA复合体在多个组织中切除前病毒DNA，包括脾、肝、肾、脑乃至循环淋巴细胞，证明HIV可在活体动物中被切除。随后在人源化小鼠和非人灵长类中获得了类似结果，AAV9-SaCas9从血液、淋巴结、脾、骨髓和脑中切除病毒DNA。CRISPR与长效ART（LASER-ART）联用进一步增强了这一效应，实现比任一单独策略更深的抑制。
与此同时，研究人员认识到单纯切除可能不够，潜伏病毒库仍是巨大障碍。传统"休克与击杀"方法使用小分子再激活前病毒，但效力低且有毒性。作为精确替代方案，CRISPR采用催化失活Cas9（dCas9）与Synergistic Activation Mediator融合（dCas9-SAM），可通过靶向LTR编程再激活潜伏HIV，触发强烈的病毒再激活，常因病毒蛋白蓄积导致细胞死亡。相反，dCas9与转录抑制因子融合（dCas9-KRAB）可将前病毒锁定于深度潜伏状态，有效阻断HIV转录而不诱导细胞毒性。激活或沉默的双重能力赋予了CRISPR在病毒库管理中的独特多功能角色。
与此同时，"保护"策略通过共受体编辑获得进展。受天然CCR5Δ32突变启发，研究人员利用CRISPR在CD4?T细胞、iPSC和造血干/祖细胞（hematopoietic stem/progenitor cell, HSPC）中破坏CCR5。编辑后的细胞抵抗R5嗜性HIV、保持分化能力且脱靶效应最小。在人源化小鼠中，移植CCR5编辑的HSPC产生了持久的HIV抗性免疫群体。针对CXCR4的类似策略产生对X4嗜性毒株的抵抗力，而P191A保护性变异的敲入则保持了正常受体功能。CCR5和CXCR4的双重编辑拓宽了对两种入侵途径的抵抗力，但CXCR4在HSPC植入中的作用仍是限制因素。
最后，"清除"策略关注病毒DNA和入侵受体之外的宿主限制因子。通过工程化具有增强衣壳识别能力的TRIM5α变异体，或破坏SAMHD1、NONO和TNPO3等依赖因子，CRISPR可进一步将平衡倾向宿主一方。
该领域持续快速发展。下一代核酸酶如SaCas9（小至适合AAV递送）、Cas12a/Cpf1（适合多重编辑且脱靶更少）和Cas13（靶向RNA，直接破坏病毒转录本）扩展了治疗选择。递送系统正从AAV向纳米颗粒和细胞外囊泡多样化发展，旨在实现更安全、更靶向的生物分布。由数千临床分离株设计的多重gRNA文库现已可应对HIV多样性的挑战，在潜伏感染细胞中实现近乎完全的前病毒切除。
挑战依然存在。Cas9免疫原性、脱靶效应以及到达每个潜伏病毒库的困难仍未解决。CRISPR能否在慢性感染人体中完全消除具有复制能力的HIV尚不可知。然而，进展轨迹清晰可见。从2013年首次体外切割HIV前病毒DNA，到在灵长类中实现多器官切除，再到CRISPR联合长效ART在小鼠中实现联合治愈，该领域已从概念验证迅速推进至现实治疗潜力。
早期细胞培养研究表明，Cas9虽高度特异，但偶尔会切割非预期基因组区域，引发对破坏必需宿主基因可能损害细胞功能的担忧。随后的T细胞系实验显示，HIV有时可完全逃避CRISPR编辑。这归因于宿主自身的DNA修复机制：易错的非同源末端连接（non-homologous end joining, NHEJ）修复Cas9-induced断裂时引入突变，无意中产生仍具复制能力的病毒逃逸变异体。然而，最持久的挑战可能在于递送。体外模型和动物研究已证明高效的前病毒靶向，但将这些成功转化至人类则困难得多。HIV在血液、淋巴组织、肠道乃至大脑的镶嵌式病毒库中建立潜伏，人源化小鼠实验表明，对这些病毒库的不完全递送会留下能够重新点燃感染的小量病毒。
展望未来，三种策略的整合——保护、切除/修饰和攻击——可能具有决定性意义。通过共受体编辑预防新感染、切除或沉默现有前病毒、并增强宿主限制因子以将平衡倾向免疫系统，CRISPR建立了对抗HIV的多层防御。改进的生物信息学工具正在优化gRNA设计以最小化脱靶效应；碱基编辑器和先导编辑器等创新修复策略正在探索以减少逃逸风险；从更安全的病毒载体到优化的非病毒纳米颗粒和瞬时RNP复合体的新型递送平台正在被工程化，以穿透长期阻碍HIV治愈策略的多样化病毒库。当与ART和免疫疗法联合时，这些创新指向持久无药缓解的可能性，并首次提供了切实的根除路径。
总而言之，通过单次HIV基因编辑注射实现摆脱HIV、ART及相关合并症的生命已在眼前。每一次精确引导的CRISPR/Cas9编辑，配合全面的gRNA文库和改进的递送载体，都使这一目标更接近现实。其可扩展性、低成本以及在靶向临床环境中单次注射的潜力，提供了优于干细胞移植等复杂疗法的明显优势，使其甚至适用于资源匮乏地区。通过降低治疗成本、减少住院需求和提高患者生活质量，基于CRISPR的HIV治疗为全球数百万人提供了广泛可及的治愈希望。
