M2巨噬细胞外泌体通过miR-383-5p/ACSL4轴调控铁死亡相关脂质过氧化信号通路缓解慢性牙周炎

《Scientific Reports》：M2-polarized RAW 264.7 macrophage-derived exosomal miR-383-5p alleviates chronic periodontitis by targeting ACSL4 to regulate osteogenic and osteoclastogenic differentiation

　　慢性牙周炎（CP）的特征是炎症性牙槽骨破坏。M2巨噬细胞来源的外泌体（M2-exosomes）可能有助于恢复骨稳态，但ACSL4相关铁死亡及脂质过氧化信号通路的贡献仍有待进一步明确。本研究探讨了M2外泌体中miR-383-5p在CP中的功能与机制。通过透射电镜（TEM）、纳米颗粒追踪分析（NTA）、阳性标记（CD63和TSG101）及阴性标记（Calnexin和GM130）对M2极化RAW 264.7巨噬细胞来源的外泌体进行了分离与表征。采用染色、RT-qPCR及Western blot评估了牙周膜干细胞（PLSCs）的成骨分化及RANKL诱导的破骨细胞生成。通过miRNA芯片分析、生物信息学、双荧光素酶报告基因及RNA拉下实验鉴定了miR-383-5p/ACSL4靶向关系。利用ACSL4过表达挽救实验、miR-383-5p缺失的外泌体以及铁死亡相关指标（ROS、Fe²?、GSH、MDA、TFRC、GPX4、SLC7A11和ACSL4）进行机制验证。在结扎诱导的小鼠模型中，通过定量Micro-CT和组织学评估。同时检测了临床样本中血清和牙龈组织中的miR-383-5p和ACSL4水平。结果显示，M2外泌体促进成骨并抑制破骨细胞生成。miR-383-5p在M2外泌体中富集，其抑制削弱了上述效应，而ACSL4沉默可挽救该损伤。ACSL4过表达逆转了M2外泌体的保护作用，并部分恢复了铁死亡相关的改变，包括ROS、Fe²?和MDA升高，GSH降低，TFRC/ACSL4升高，GPX4/SLC7A11降低。miR-383-5p缺失的外泌体表现出调控作用减弱。在体内实验中，M2外泌体减少了CEJ-ABC距离，改善了BV/TV和Tb.Th，并减少了炎症和胶原丢失。在患者中，血清和牙龈组织中的miR-383-5p下调，牙龈组织ACSL4上调，血清miR-383-5p对CP具有较高的特异性但灵敏度一般。M2外泌体通过递送miR-383-5p，靶向ACSL4并调控铁死亡相关的脂质过氧化信号通路，从而增强成骨并抑制破骨细胞生成来缓解CP。血清miR-383-5p是一种有前景的CP辅助而非独立生物标志物。