《Animals》：Dietary Artemisia argyi Inclusion Modulates Gastrointestinal Morphology, Immune-Related Indicators, and Bacterial Community Composition in Hu Sheep
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抗生素相关的胃肠道菌群失调（dysbiosis，微生物稳态紊乱）会损害微生物稳态与黏膜健康，因而亟需能够支持胃肠道稳态的天然饲料添加剂。艾叶（Artemisia argyi）含有具抗菌、抗氧化与免疫调节特性的生物活性成分，但其对反刍动物胃肠道的作用尚缺乏系统表
抗生素相关的胃肠道菌群失调（dysbiosis，微生物稳态紊乱）会损害微生物稳态与黏膜健康，因而亟需能够支持胃肠道稳态的天然饲料添加剂。艾叶（Artemisia argyi）含有具抗菌、抗氧化与免疫调节特性的生物活性成分，但其对反刍动物胃肠道的作用尚缺乏系统表征。研究人员评估了在庆大霉素（gentamicin）相关胃肠道干扰后，饲粮添加艾叶是否改变幼年胡羊的胃肠道形态、血清免疫相关指标、肠道炎症与屏障相关标志物以及瘤胃和结肠细菌菌群结构。将40只1月龄雄性胡羊随机分为4组（每组 n = 10）：对照组（Ctrl）、庆大霉素攻毒模型组（Model）、低添加量艾叶组（ML，1%）与高添加量艾叶组（MH，3%）。在为期7 d的建模阶段，Model、ML与MH接受庆大霉素而Ctrl不接受；庆大霉素给予随后终止。Day 0 被定义为建模阶段完成后紧邻的基线采样点。血液于 Day 0 自四组采集；基线采血后立即开始为期21 d的饲粮干预。干预期间 Ctrl 与 Model 饲喂基础饲粮，ML 与 MH 饲喂分别含1%和3%艾叶的基础饲粮。此后于干预第7、14、21天采集全部羊只血样；因此血清分析采用每组 n = 10 只动物及来自同一批动物的重复测量。终末组织与内容物分析使用每组 n = 3 只处死羊只。饲粮添加艾叶与部分胃肠道形态学指标的改善相关，但反应存在肠段与添加量差异。血清免疫球蛋白与细胞因子呈现时间与处理相关模式，而非一致性反应。肠道 qPCR 反应具有基因与肠段特异性，免疫组化效应则依标志物及定量指标而不同。在菌群方面，部分类群在各组间存在差异，而文稿所示属水平 PCoA 分析未在瘤胃（R = 0.0803, p = 0.292）或结肠（R = ?0.0185, p = 0.528）群落中检测到显著的全局分离。总体而言，庆大霉素暴露后饲粮添加艾叶与选定的宿主及微生物反应相关，但效应并非一致的剂量依赖，也未证实胃肠道普遍性恢复或微生物功能重建。需要更大的分析样本量与直接的功能测定加以验证。
**一、研究背景、方法与总体结论概述**
胃肠道是反刍动物养分消化吸收、免疫防御与宿主—微生物互作的核心器官。1月龄左右羔羊的瘤胃发育、微生物定植、上皮屏障成熟与黏膜免疫建立仍在进行，转饲、环境应激、病原暴露及抗菌药物治疗都可能破坏胃肠道稳态，表现为群落结构改变、黏膜形态与上皮完整性受损以及炎症与免疫反应异常。抗生素暴露尤为关键：它可减少敏感共生菌、扰乱生态竞争与微生物代谢物网络，并促使耐药或机会性类群扩增，进而加重上皮损伤与炎症激活。庆大霉素（gentamicin）在动物模型中已被证实可扰动肠道微生物多样性与群落组成，故被用作攻毒因子。艾叶（Artemisia argyi）为传统药用植物，富含黄酮类、多糖、酚酸与挥发油，具抗氧化、抗菌、抗炎与免疫调节活性，已有报道其在多种动物中可改变肠道形态、免疫相关反应与菌群组成；但关于反刍动物、特别是抗生素干扰后同时评价形态、屏障、免疫与菌群的整体性研究仍很有限。胡羊是我国重要地方品种并广泛用于集约化生产，因此支持幼畜胃肠道稳态的营养策略具有实践价值。据此，研究人员建立庆大霉素相关胃肠道干扰模型，检验艾叶能否缓解所选胃肠道改变，并假设其可相对模型组改善宿主与细菌指标。
主要技术方法（简要概括）：40只1月龄雄性胡羊随机分为Ctrl、Model、ML（1%艾叶）与MH（3%艾叶）4组（每组 n = 10）。Model、ML、MH以硫酸庆大霉素注射液经口灌胃（0.5 mL/kg，即10 mg/kg，每日2次，合计20 mg/kg BW·d）连续7 d建模，Ctrl不给药；建模与饲粮干预阶段先后衔接、互不重叠。以建模结束当日为 Day 0 基线采血，随即开始21 d干预，于第0、7、14、21天重复采血，血清免疫球蛋白与细胞因子以重复测量方差分析。每组3只屠宰取瘤胃、十二指肠、空肠、回肠与结肠内容物，进行H&E组织形态计量、扫描电镜（SEM）定性观察、实时荧光定量PCR（qPCR，2
?ΔΔCt法）、回肠免疫组化及瘤胃与结肠内容物细菌16S rRNA基因V3–V4区测序（DADA2 获得 ASV，SILVA 数据库注释，PCoA/ANOSIM 与 LEfSe 分析）。样本来自新疆（塔里木大学动物伦理委员会批准，新疆温兴源牧业基地）。
总体而言，研究人员得出：艾叶添加与所选胃肠道形态学、免疫及菌群的节段特异性、时点特异性反应相关，效应不呈一致剂量依赖，也未证明整体功能恢复；结果支持将其作为天然饲料添加剂深入研究，但受限于终末分析重复数（n = 3）且需功能验证。
**二、研究结果**
3.1 饲粮艾叶添加对胃肠道形态的影响。以攻毒末临床观察（Model 出现腹泻、软便或水样便、精神沉郁，Ctrl 食欲正常、粪便呈颗粒状）确认模型建立。H&E 定量显示：瘤胃乳头长度处理效应显著（p < 0.001），但按上角标规则 Ctrl 与 Model 共享字母、差异不显著，ML、MH 与 Model 差异显著；乳头宽度与黏膜厚度无显著处理效应。小肠反应具节段特异性：十二指肠 ML、MH 绒毛长度高于 Model，隐窝深度未见一致改善；空肠仅 ML 绒毛长度高于 Model，ML 与 MH 隐窝深度均低于 Model；回肠绒毛长度仅 MH 与 Model 差异显著，回肠绒毛高度/隐窝深度比（V/C）仅 ML 高于 Model。
3.2 SEM 观察的胃肠道超微结构。Model 组瘤胃黏膜表面较不规则、上皮脱落更明显；十二指肠可见腔面不平整、上皮缺失、下组织暴露及渗出物黏附；艾叶组表面有序性呈部分定性改善，ML 与 MH 间不一致。SEM 仅作定性描述，不构成独立统计学证据。
3.3 血清细胞因子。IL-6 变化较小且无一致处理模式；IL-10 随试验进程总体升高，MH 后期数值更高；Day 0 时 Model 的 TNF-α 显著高于 Ctrl（p < 0.0001），其后浓度波动，第21天 MH 数值更接近 Ctrl。数据反映时间与处理相关模式，而非各标志物一致抗炎反应。
3.4 血清免疫球蛋白。IgG 与 IgM 在后期总体升高，MH 数值升高最明显；IgA 波动较小且各组第21天趋于接近。结果仅支持时间与处理相关的变异，不能概括为各艾叶组一致性显著升高。
3.5 肠道炎症与屏障相关基因表达。三个肠段中 Model 多数炎症基因表达高于 Ctrl，但幅度与显著性依基因与肠段而异；艾叶降低部分升高，其中 IFN-γ 方向最一致，IL-6、IL-17、TNF-α 反应在十二指肠、空肠、回肠间不一。Claudin-1（紧密连接蛋白-1）在十二指肠各组几乎无分离，在空肠与回肠 Model 升高、添加艾叶后降低，故不能表述为艾叶上调 Claudin-1。
3.6 回肠免疫组化指标。IgA、MUC2（黏蛋白2）、Occludin 与 ZO-1（闭合小带蛋白-1）均在各组检出。平均染色强度仅 IgA 存在显著组间效应（p < 0.01），MUC2（p = 0.084）、Occludin（p = 0.359）、ZO-1（p = 0.123）不显著；阳性面积百分比仅 MUC2 显著（p = 0.014），IgA、Occludin、ZO-1 不显著。提示标志物与指标特异的变化，不能证明屏障功能普遍增强。
3.7 瘤胃菌群。属水平 PCoA 结合 ANOSIM 未显示四组间显著整体分离（R = 0.0803, p = 0.292）；但 Wujia、Olsenella、Parafannyhessea、Lactobacillus、Ligilactobacillus、Hominimerdicola、Anaerotruncus 等属相对丰度存在组间差异，LEfSe 亦识别出处理相关差异类群，故仅支持类群特异性变化。
3.8 结肠菌群。PCoA/ANOSIM 同样未检出显著整体分离（R = ?0.0185, p = 0.528）；Aristaeella、Desulfovibrio、Feifania、Negativibacillus、Hydrogenoanaerobacterium、Campylobacter 等属丰度存在组间差异并经 LEfSe 得到处理相关类群，应解读为类群特异性组成差异而非群落整体重建或功能恢复。
**三、讨论与结论**
讨论部分强调，形态学测量属结构性而非功能性指标：未测定养分消化率、转运与吸收，亦未直接测定肠道通透性，因此乳头与绒毛变化不能等同于发酵、吸收或黏膜保护能力提升；仅设两个添加量且终末重复为 n = 3，无法确定最适添加量，反应亦非稳定剂量依赖（MH 瘤胃乳头长度数值最大，而多项肠段指标更利于 ML）。血清细胞因子与免疫球蛋白呈时相性变化，不支持整体抗炎或免疫刺激；血清免疫球蛋白亦不能代表肠腔分泌型免疫应答，未来需纳入分泌型 IgA、局部细胞因子蛋白、黏膜免疫细胞表型与功能屏障检测。菌群方面，16S rRNA 无法反映代谢活性、通路功能与因果，Lactobacillus、Ligilactobacillus、Desulfovibrio 等仅可作为待验证的处理相关细菌标志物；各维度变化的一致亦不能证明彼此间的因果联系。局限包括：终末分析样本量小、商品化基础饲粮未公开原料配比、部分试剂与仪器信息无法核实、未做微生物功能与代谢组分析、未测通透性与艾叶活性成分含量、未评价生长性能与饲料效率。研究结论为：庆大霉素暴露后饲粮添加艾叶与幼年胡羊所选胃肠道反应相关，可改变特定瘤胃与肠道形态学指标、血清免疫相关动态谱、肠道炎症/屏障相关标志物以及瘤胃与结肠部分细菌类群相对丰度；反应随肠段与添加量而不同，属水平 PCoA/ANOSIM 未显示显著整体群落分离；血清结果基于每组 n = 10，终末组织与内容物结果基于每组 n = 3，因此这些发现支持将艾叶作为天然饲料添加剂进一步评价，但不足以确立胃肠道功能普遍改善或微生物恢复。
