《Microbiology Spectrum》：Longitudinal and adjusted prognostic assessment of calprotectin in Gram-negative sepsis with acute respiratory failure
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由革兰阴性血流感染引起的脓毒症以动态宿主反应为特征，但钙卫蛋白（calprotectin）的纵向及增量预后价值仍不确定。研究人员开展了一项多中心回顾性观察研究，纳入82例革兰阴性血流感染、脓毒症合并急性呼吸衰竭的成人患者。在抗生素治疗前（T0）、第3天（T1）
由革兰阴性血流感染引起的脓毒症以动态宿主反应为特征，但钙卫蛋白（calprotectin）的纵向及增量预后价值仍不确定。研究人员开展了一项多中心回顾性观察研究，纳入82例革兰阴性血流感染、脓毒症合并急性呼吸衰竭的成人患者。在抗生素治疗前（T0）、第3天（T1）和第7天（T2）分别检测血清钙卫蛋白、常规生物标志物、细胞因子及生长因子，并按28天生存情况进行比较。64例患者存活，18例死亡。钙卫蛋白随时间下降，但在T0（P = 0.003）、T1（P = 0.037）和T2（P = 0.035）时非存活者中仍较高；其纵向轨迹在存活者与非存活者之间无差异（P = 0.408）。部分常规和免疫生物标志物在T2时显示名义差异，但63项次要生物标志物×时间比较经错误发现率（false-discovery-rate，FDR）校正后均无统计学意义。仅序贯器官衰竭评估2（sequential organ failure assessment 2，SOFA-2）即能强效区分死亡风险（受试者工作特征曲线下面积［area under the receiver operating characteristic curve，AUC］为0.897；95% CI 0.828–0.965），且优于基线钙卫蛋白（AUC 0.728；DeLong P = 0.027）。校正年龄和SOFA-2后，基线钙卫蛋白仍与死亡独立相关（OR 2.07，每倍增；95% CI 1.14–4.20；P = 0.018），但其加入仅带来适度且无统计学意义的判别改善（ΔAUC 0.023；P = 0.117）。SOFA-2是主要的预后判别指标；钙卫蛋白可能提供补充而非独立的预后信息，并需外部验证。
脓毒症是宿主对感染反应失调引起的危及生命的器官功能障碍，其病程呈现时间动态演变，单一时间点测量难以充分反映宿主反应轨迹。钙卫蛋白（calprotectin）是一种由中性粒细胞释放的S100A8/S100A9异二聚体，可反映先天免疫激活，但在革兰阴性血流感染合并急性呼吸衰竭（acute respiratory failure，ARF）患者中，其纵向变化和增量预后价值尚不明确。为探讨这一问题，研究人员开展了一项多中心回顾性观察研究，经意大利卡拉布里亚大区伦理委员会批准（批准号128/2023），纳入82例成人患者，均符合脓毒症诊断、血培养为革兰阴性菌、存在ARF，且具有诊断时抗生素治疗前（T0）、第3天（T1）、第7天（T2）三个时间点的血清样本。存活者64例（78%），非存活者18例（22%）。该研究旨在明确钙卫蛋白的纵向轨迹及其对28天死亡率的独立和增量预后价值，并与常规生物标志物、细胞因子和生长因子进行比较。
研究人员采用的主要技术方法包括：用商业ELISA试剂盒（Calprest NG-S，Eurospital Diagnostic）定量检测血清钙卫蛋白；用化学发光免疫分析法检测C反应蛋白（C-reactive protein，CRP）和降钙素原（procalcitonin，PCT）；用Randox多生物芯片平台（Cytokine and Growth Factors Array）检测12种细胞因子和生长因子（包括IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IFN-γ、MCP-1、TNF-α、表皮生长因子［EGF］和血管内皮生长因子［VEGF］）。统计方法采用非参数检验、Friedman检验、Benjamini-Hochberg错误发现率（false-discovery-rate，FDR）校正、重复测量混合效应模型、受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线、DeLong检验、Firth偏倚校正 logistic 回归及500次分层bootstrap内部验证。所有分析均基于完整队列（n=82），无缺失数据填补。
研究结果如下。
**Calprotectin（钙卫蛋白）**
在总体队列中，钙卫蛋白浓度随时间显著下降，T2低于T0和T1（P<0.001和P=0.010）。在存活者和非存活者中均观察到下降趋势，但非存活者在T0、T1、T2三个时间点的钙卫蛋白水平均显著高于存活者（分别P=0.003、P=0.037、P=0.035）。然而，组×时间交互项检验显示其纵向轨迹在两组间无显著差异（P=0.408）。ROC分析显示钙卫蛋白在T0的AUC为0.728，T1为0.662，T2为0.664，提示其具有中等判别能力。
**Biomarkers（常规生物标志物）**
在总体队列中，白细胞计数、中性粒细胞/淋巴细胞比值（neutrophil-to-lymphocyte ratio，NLR）、CRP和PCT均随时间显著降低，T2低于T0和T1。非存活者中NLR和CRP在T2时名义上高于存活者（P=0.002和P=0.013），但经FDR校正后这些差异不再显著。T2时NLR的AUC为0.742（95% CI 0.604–0.880），CRP的AUC为0.692（95% CI 0.558–0.826），均属探索性分析。在22项纵向轨迹比较中，仅血小板轨迹在FDR校正后仍显示组间差异（q=0.044）。
**Cytokines（细胞因子）**
总体队列中IL-4、IL-6、IL-10、MCP-1和TNF-α随时间变化。非存活者在T2时IL-4和IL-6名义上高于存活者（均P=0.011），但经FDR校正后均不显著（q=0.167）。没有一种细胞因子显示出显著的组间纵向轨迹差异。T2时IL-4和IL-6的AUC均为0.697，结果视为假设生成性质。
**Growth factors（生长因子）**
EGF和VEGF在总体上无显著时间变化或组间差异，仅在非存活者中观察到EGF从T0到T2下降，但无组间轨迹差异，临床意义有限。
**Relationships between baseline calprotectin and other measures（基线钙卫蛋白与其他指标的关系）**
探索性相关分析显示，基线钙卫蛋白与白细胞计数、中性粒细胞计数、NLR、CRP和VEGF呈正相关（经FDR校正后显著），与SOFA-2的相关性在校正后不再显著，提示钙卫蛋白与中性粒细胞相关及常规炎症指标存在部分重叠。
**Prognostic performance of SOFA-2 and multivariable models（SOFA-2及多变量模型的预后表现）**
SOFA-2单独判别28天死亡率的AUC为0.897（95% CI 0.828–0.965），显著优于基线钙卫蛋白（P=0.027）。最优阈值≥5分，灵敏度100%，特异度60.9%。校正年龄和SOFA-2后，基线钙卫蛋白仍与死亡独立相关（OR 2.07，每倍增；95% CI 1.14–4.20；P=0.018），但将钙卫蛋白加入临床模型仅使ΔAUC增加0.023（P=0.117），未达统计学意义。NLR、CRP、PCT校正后均无独立关联。以年龄+SOFA-2+钙卫蛋白为最简模型，其表观AUC为0.922，乐观校正AUC为0.907；探索性多标志物模型（加NLR和CRP）未显示额外优势。
讨论部分总结：非存活者钙卫蛋白绝对浓度更高，但纵向轨迹与存活者一致，提示其下降不代表特异性的治疗反应或炎症缓解，而可能与基线严重程度更高有关。SOFA-2是主导的预后判别工具，钙卫蛋白仅提供有限的补充信息。NLR和CRP的后期差异及细胞因子、生长因子结果均未通过FDR校正，应视为探索性。局限性包括回顾性设计、样本量较小（尤其死亡数仅18）、完整采样要求可能漏掉早期死亡病例、未测内毒素或细菌载量、细胞免疫表型及组织反应，且研究队列限定于革兰阴性菌血症合并ARF，结果不能推广至其他脓毒症表型。结论为：在革兰阴性血流感染、脓毒症合并ARF的成人患者中，SOFA-2是早期预测28天死亡的最强指标；基线钙卫蛋白虽在校正年龄和SOFA-2后独立相关，但其增量判别价值有限且无统计学意义；应将其视为临床严重程度评估的补充而非单独预后工具，并需更大样本的前瞻性外部验证。
