《npj Viruses》：Strengthening diagnostic capacity for viral hemorrhagic fevers in Forest Guinea: advances in Lassa fever case detection
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病毒性出血热（Viral Hemorrhagic Fevers, VHFs）在资源有限环境中仍然是主要的公共卫生威胁。2014–2016年埃博拉疫情暴露了包括几内亚在内的高风险国家在实验室准备和诊断能力方面的关键缺口。为了在VHF暴发中实现可持续的国内实验
病毒性出血热（Viral Hemorrhagic Fevers, VHFs）在资源有限环境中仍然是主要的公共卫生威胁。2014–2016年埃博拉疫情暴露了包括几内亚在内的高风险国家在实验室准备和诊断能力方面的关键缺口。为了在VHF暴发中实现可持续的国内实验室能力以支持早期检测和快速响应，一项分散式诊断实验室加强计划在几内亚森林地区启动，分别于盖凯杜（Guéckédou，2017年）和恩泽雷科雷（N'Zérékoré，2021年）设立实验室。2017年至2024年间，两个实验室共检测了4683份来自VHF疑似病例的样本。其中，47份（1%）经分子检测鉴定为VHF阳性，包括2021年埃博拉病毒病（Ebola Virus Disease, EVD）复发和马尔堡病毒病（Marburg Virus Disease, MVD）出现时的样本，实验室为这些事件的快速暴发检测和响应提供了支持。值得注意的是，30例拉沙热（Lassa Fever, LF）病例获得了实验室确认，病死率（Case Fatality Rate, CFR）为67.9%。其中，分别有50.0%和27.6%的病例来自盖凯杜省和恩泽雷科雷省。在该计划之前，几内亚的拉沙热检测仍然是个案性的。通过分子检测还鉴定出1例黄热病（Yellow Fever）和1例登革热（Dengue Fever）。本地嵌入式实验室能力的建立增强了几内亚的VHFs防范、监测和响应能力，为拉沙热流行病学和卫生系统韧性提供了支持。
**论文解读**
**一、研究背景与问题**
病毒性出血热（Viral Hemorrhagic Fevers, VHFs）是由人兽共患RNA病毒引起的一类严重传染病，其动物贮存宿主包括啮齿类动物、蝙蝠和节肢动物，人类通过接触感染宿主或人际传播而感染。VHFs的临床诊断具有挑战性，因为其早期症状（发热、不适、头痛、肌痛）与其他感染重叠，确诊依赖分子检测，主要是实时逆转录聚合酶链反应（Real-Time Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction, RT-PCR）。自2005年《国际卫生条例》通过以来，世界卫生组织（World Health Organization, WHO）已宣布八次国际关注的突发公共卫生事件，其中五次起源于资源有限地区。2014–2016年西非埃博拉病毒病（Ebola Virus Disease, EVD）疫情暴露了几内亚等受影响国家在VHFs检测能力和本地受训人员方面的严重不足，导致森林地区首例埃博拉病例检测延迟，进而推迟了疫情确认和控制措施的及时实施。此前，VHFs病例的检测完全依赖位于首都科纳克里的国家参考实验室——几内亚病毒性出血热实验室（Centre de Recherche en Virologie – Laboratoire des Fièvres Hémorragiques de Guinée, CRV-LFHVG），限制了森林地区的监测能力，导致关于几内亚VHF监测和流行病学的已发表数据稀少。尤其是在拉沙热（Lassa Fever, LF）方面，尽管血清学证据表明几内亚中部和森林地区存在广泛的人群暴露，但急性病例报告极为罕见。因此，在VHF易发地区建立分散式实验室能力、实现可持续的国内实验室监测，成为几内亚卫生部的优先事项。
**二、研究内容与重要意义**
研究人员报告了一项在几内亚森林地区开展的VHFs诊断监测活动的长期评估。2016年底，在2014–2016年西非EVD疫情中心附近，启动了VHF防范实验室能力加强计划。这促成了盖凯杜病毒性出血热实验室（Laboratoire des Fièvres Hémorragiques Virales de Guéckédou, LFHV-GKD）于2017年投入运营，随后恩泽雷科雷地区医院病毒性出血热实验室（Laboratoire des Fièvres Hémorragiques Virales de l'H?pital Régional de N'Zérékoré, LFHV-HRNZE）于2021年加入该计划。两个实验室在国家监测系统框架内为多种VHFs提供免费分子诊断检测，包括丝状病毒（埃博拉病毒[Ebola Virus, EBOV]和马尔堡病毒[Marburg Virus, MARV]）、拉沙病毒（Lassa Virus, LASV）、黄热病毒（Yellow Fever Virus, YFV）和登革病毒（Dengue Virus, DENV）。2017年至2024年间，两个实验室共检测4683份疑似VHF样本，47份（1%）呈VHF阳性，包括2021年EVD复发和马尔堡病毒病（Marburg Virus Disease, MVD）出现样本。尤其重要的是，共确认30例拉沙热病例，病死率高达67.9%，为认识几内亚拉沙热流行病学提供了关键证据。此外，研究人员还在该地区检测到1例黄热病和1例登革热。该研究证明，在资源有限的流行地区建立嵌入式实验室能力能够显著增强VHFs的防范、监测和响应水平，提升卫生系统韧性。研究还强调了可持续资金对维持此类能力的重要性，以及提高几内亚对拉沙热认知的必要性。
**三、关键技术方法概述**
研究基于两项分散式诊断实验室的运营评估，采用回顾性描述性研究方法，分析了2017年1月至2024年12月LFHV-GKD和2021年2月至2024年12月LFHV-HRNZE的常规监测数据。样本来源于国家常规监测团队和临床团队收集的VHF疑似病例标本（EDTA全血或口腔拭子），病例定义依据几内亚国家综合疾病监测与响应技术指南。实验室采用实时RT-PCR平台进行分子检测，使用RealStar
?系列试剂盒检测丝状病毒、LASV（靶向S和L基因片段）、YFV和DENV；LFHV-HRNZE在2021年EVD疫情期间还使用了Xpert
? Ebola和OraQuick? Ebola快速抗原检测。部分LASV阳性样本使用Panadea ELISA试剂盒检测抗LASV核蛋白IgG和IgM抗体。流行病学调查由卫生部协调，生态学调查由环境和可持续发展部协调，在小规模哺乳动物中采用随机捕获、尸检和RT-PCR检测方法。数据管理使用Excel数据库，统计分析使用STATA v.18软件，地图使用QGIS 3.26版本制作，图形使用GraphPad Prism v.10生成。研究获得了几内亚国家伦理委员会批准，因回顾性同意不可行而豁免知情同意。
**四、主要研究结果**
**（1）几内亚森林地区基于实验室的VHFs监测的建立**
2016年底在几内亚森林地区启动的长期实验室能力加强计划，在CRV-LFHVG和德国伯恩哈德·诺赫特热带医学研究所（Bernhard Nocht Institute for Tropical Medicine, BNITM）的合作下，促成了LFHV-GKD的建立。该计划结合了基础设施建设与人员能力强化，包括生物安全、生物安保、质量管理体系和VHF特异性分子诊断培训，并辅以监督实践、持续指导和培训者培训方法。LFHV-HRNZE最初于2014年为EVD响应而设立，于2021年EVD复发期间加入该计划，其基础设施和人员得到加强，升级了实验室流程并建立了鉴别性VHF检测方案。自2021年起，两个实验室按照与国家参考实验室CRV-LFHVG相同的标准操作程序（Standard Operating Procedures, SOPs）协调开展分子检测。运营初期所有阳性结果均经CRV-LFHVG和BNITM确认后方可正式披露，结果随后通过官方渠道及时通报卫生当局。
**（2）加强实验室能力的诊断活动——LFHV-GKD**
2017年1月至2024年12月，LFHV-GKD共检测2200份样本（2111份EDTA血液和89份口腔拭子），样本数量年际波动较大（133至516份）。2022年在341份样本上进行了1154次RT-PCR检测，每份样本约3.4次检测。样本主要来自几内亚境内（99.5%），高度集中于盖凯杜省（95.8%）。两性分布均衡（女性56.5%），中位年龄35岁[四分位距(IQR) 24–50]。LASV的RT-PCR阳性率在监测期间每年介于0.6%至2.8%之间。2023年检测到1例YFV阳性。EBOV和MARV仅在2021年检测到阳性（分别为4.0%和0.5%）。从样本采集到实验室结果的中位周转时间（Turnaround Time, TaT）为1天[IQR 0–2]。从症状出现到样本采集的中位时间为4天[IQR 2–8]，2017年有45%的样本该时间超过10天，到2024年降至3%。
**（3）加强实验室能力的诊断活动——LFHV-HRNZE**
2021年2月至2024年12月，LFHV-HRNZE共检测2483份样本，其中85.0%（2099份）在2021年EVD复发期间收集。2022至2024年间在384份样本上进行了1480次RT-PCR检测，每份约4次检测。样本中位年龄46岁[IQR 27–67]，两性分布相似（女性46.9%），主要来自恩泽雷科雷省（83.8%）。在学生中检出比例最大（29.9%）。2021年检测到14份EBOV阳性（0.7%），同年设置LASV RT-PCR后检出9例（3.9%），其中2例为回顾性检测。2021至2024年共诊断14例拉沙热，其中12例前瞻性通报，总体RT-PCR阳性率2.3%。2024年检出1例输入性DENV阳性。实验室TaT中位数为0天。
**（4）2020年至2024年检出的拉沙热情况**
30例LASV阳性中28例为前瞻性检出并通报。病例地理分布高度集中于实验室所在省，盖凯杜省15例，恩泽雷科雷省8例，2021年（10例）和2023年（9例）病例数最高。中位年龄31岁[IQR 24–50]，男性占66.7%。农民（23.3%）、家务工作者（23.3%）和学生（20.0%）为主要职业类别。主要症状包括发热（90%）、乏力（73%）、呕吐（63%）和出血（60%）。从症状出现到样本采集中位时间为7天[IQR 3–10]。LASV RT-PCR的S片段中位Ct值为30[IQR 23–33]，L片段为26.5[IQR 22–31]，两者呈强正相关。Ct值≤23的个体CFR（S片段100%，L片段80%）高于Ct值>23者。总体CFR为67.9%（19/28）。死亡患者中位年龄（35岁）高于存活者（25岁）。22份样本的血清学检测显示31.8% IgM阳性，72.7% IgG阳性。死亡与存活个体在性别、年龄、居住省份、症状到采样时间、Ct值和LASV血清状态方面存在差异，但由于病例数少，未进行多变量建模和正式统计检验。
**（5）拉沙热病例的临床管理和流行病学调查**
实验室确认后，所有患者立即在流行病治疗中心（Centre de Traitement des épidémies, CTEpi）隔离。10例（35.7%）接受了利巴韦林（Ribavirin）治疗，其余因药物供应有限或临床禁忌症（妊娠或重症快速死亡）未接受治疗。临床管理以支持治疗为主。3例孕妇中2例死亡，均表现为高病毒血症（Ct值均为18），3例均出现出血症状且均未使用利巴韦林。2例经历流产后住院，1例分娩活婴但婴儿出生数天后死亡。流行病学调查指向自然啮齿类动物宿主传播，未发现继发传播。接触者监测至暴露后21天，仅出现符合疑似VHF病例定义症状时进行RT-PCR检测。生态和环境调查在2022至2024年间开展了7次，仅2022年在盖凯杜省Kassadou副省的一个调查点从啮齿动物样本中检出LASV。
**五、讨论总结与研究结论**
本研究展示了2014–2016年EVD疫情后在几内亚森林地区三级医疗机构层面取得的重大改善——两个实验室的建立和加强提供了免费的常规VHF诊断服务，使以往缺乏诊断能力的分散式资源有限地区能够检测五种高优先级病毒，契合非洲的诊断需求。多样化的实时分子检测组合实现了有效病例检测，所检测到的VHF事件包括本文描述的1例黄热病和30例拉沙热，以及此前报道的EVD、MVD和登革热。拉沙热CFR为67.9%，高于几内亚此前报道的18%和利比里亚的40%，但与塞拉利昂的69%相似；这一高CFR可能存在偏倚，因为就医发热个体可能已处于疾病进展晚期。不足40%的患者接受了利巴韦林治疗，反映药物供应有限和早期死亡。症状出现至采样7天的中位时间提示存在延迟就诊，改善拉沙热认知并加强基层卫生服务有助于早期病例发现和及时管理，对孕妇尤为重要。研究存在重要局限性：临床数据非系统性收集、地理偏倚（约75%病例来自实验室所在地）、马森塔省虽有高血清阳性率（59.6%）但未发现病例。德国卫生部全球健康保护计划（Global Health Protection Programme, GHPP）对长期能力建设至关重要，然而此类资金正日益受限，可能危及多年积累的国家资产。维持该能力极具挑战，尤其是在本已脆弱的低收入和中等收入国家卫生体系中。总之，几内亚在EVD疫情后改善了对VHFs的认知、态度和实践，但差距依然存在，尤其在农村卫生机构和拉沙热管理方面。研究强调了在流行地区投资实验室基础设施和人员培训的必要性，不仅可改善疾病监测，还能增强整体卫生系统韧性。未来研究应评估加强实验室能力对早期检测和死亡率的长期影响，并探索新型诊断工具（如快速抗原检测）以加速病例识别。研究人员还倡导提高几内亚对拉沙热的认知——这一疾病因其在该国的低发病率而常被忽视。
