摘要
凝胶电泳广泛用于蛋白质和核酸分析。从琼脂糖凝胶中回收核酸既方便又高效，但蛋白质回收则不然。本研究旨在开发并验证一种从凝胶中回收蛋白质的新方法。方法：凝胶电泳分离蛋白质后，含有目标蛋白质的切下的凝胶切片使用与核酸纯化相同的硅胶柱工作流程进行处理，但使用专门针对蛋白质回收适配的缓冲液。这种方法只需要短暂的离心步骤，避免了繁重的萃取和专用设备。结果：全蛋白质组回收显示该方法略微倾向于低分子量和酸性蛋白质，而单个蛋白质的回收效率在 69.9% 至 86.7% 之间，且与蛋白质固有性质无相关性。该方法有效支持了抗原纯化。由回收组分构建的香蕉（Musa acuminata AAA 组'Brazilian'）蛋白质组文库包含超过 18,000 个蛋白质组和 27,000 个单个蛋白质，与单样本的直接 DIA 分析相比，显著提高了基于文库的数据非依赖采集（DIA）中的蛋白质鉴定能力。结论：该方法架起了基于凝胶的蛋白质分离和基于柱的纯化之间的桥梁，使蛋白质纯化像核酸纯化一样简单、快速且可扩展。它为蛋白质组学样品制备、抗原纯化和 DIA 工作流程提供了一种实用的替代方案。
