摘要
还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）维持还原性生物合成、抗氧化防御、氧化酶活性及氧化还原信号传导；然而，以"NADPH成像"为题的研究往往探测的是生化上不等价的变量和解析上不同的终点。为解决这一歧义，本综述根据分析物定义事件、光学转导或读出、采集方式和应用场景对现有方法进行了系统梳理。提取法和酶偶联法可以定量测定回收的NADPH、氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP+）、总NADP(H)或衍生比值，但以牺牲亚细胞信息为代价。相比之下，基于蛋白质的、遗传编码的及化学遗传学系统能够实现可逆的、可按区室定位的检测，涵盖传感器可及的辅因子结合、配体依赖性组装、信号中继输出或NADPH/NADP+平衡；然而，定量解释仍取决于亲和力、传感器丰度、pH、成熟度、校准及传感器引起的缓冲效应。基于反应的探针提供了最广泛的谱学和成像灵活性——包括比值成像、近红外、双光子及光声成像模式——但大多数依赖于还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）和NADPH共有的氢转移化学。在缺乏匹配的动力学和同时进行的混合辅因子实验的情况下，NAD(P)H响应是最为可辩护的命名方式。无标记自发荧光、荧光寿命成像显微镜（FLIM）和相量分析保留了天然的空間信息；即便如此，它们报告的是综合强度、结合态或代谢对比度，而非普适的绝对NADPH浓度。跨各技术模式，严谨的解释需要有生理相关性的浓度范围、产物或结合机制验证、基质及细胞器特异性对照、时间分辨校准，以及对池容量或通量的正交测量。通过将每个信号产生事件与其可合法支持的终点进行对应，本综述建立了平台选择和解释NADPH相关光学变化的机制基础，适用于纯化系统、细胞、组织和生物体液。
