《Behavioural Brain Research》：Therapeutic Potential of Mesenchymal Stem Cell-Derived Extracellular Vesicles as a Cell-Free Approach in Autism Spectrum Disorder: A Systematic Review and Meta-Analysis of Preclinical Studies
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摘要背景自闭症谱系障碍（ASD）是一种复杂的神经发育性疾病，表现为社交互动困难、重复性行为模式及神经炎症，目前缺乏有效的治疗方法。间充质干细胞来源的细胞外囊泡（MSC-EVs）因其免疫调节和再生特性，成为一种有前景的无细胞疗法。本研究评估了MSC-EVs在ASD临床前模型中的
摘要
背景
自闭症谱系障碍（ASD）是一种复杂的神经发育性疾病，表现为社交互动困难、重复性行为模式及神经炎症，目前缺乏有效的治疗方法。间充质干细胞来源的细胞外囊泡（MSC-EVs）因其免疫调节和再生特性，成为一种有前景的无细胞疗法。本研究评估了MSC-EVs在ASD临床前模型中的疗效。
方法
遵循PRISMA指南，我们进行了系统综述和Meta分析，检索了PubMed、Embase、Scopus和Web of Science数据库。采用SYRCLE工具评估偏倚风险。使用随机效应模型计算标准化均数差（SMD），以评估MSC-EVs对社交性、重复行为及炎症因子的影响。通过亚组分析、敏感性分析和发表偏倚评估来应对异质性。
结果
共纳入5项研究（2018–2024年）。接受MSC-EVs治疗的鼠类显示社交能力显著改善（SMD =1.34，95% CI:0.68–2.76），重复行为减少（SMD =-1.12，95% CI:-0.65至-1.59），并调节了神经炎症，促炎因子水平降低（IL-1，SMD = -2.28，95% CI:-0.33至-4.24；TNF-α，SMD = -1.22，95% CI:-0.47至-1.97；IL-6，SMD = -1.03，95% CI:-0.38至-1.68），而IL-10水平升高（SMD =0.58，95% CI:0.03至1.13）。亚组分析表明，脐带来源和脂肪来源的MSC-EVs具有更优的疗效。
结论
MSC-EVs在ASD临床前模型中展现出显著的治疗潜力，通过改善核心症状和调节炎症发挥作用。然而，现有研究数量有限且存在异质性，凸显了建立标准化方案并进一步开展临床前研究的必要性，以推动临床转化。
引言
自闭症谱系障碍（ASD）是一组复杂的神经发育性疾病，通常在三岁前出现，表现为社交互动、沟通（包括言语和非言语）方面的困难，以及重复性或限制性行为[1]。ASD的严重程度差异较大，从个体能够独立生活的轻度病例到需要大量支持的严重形式[2]。其病因与遗传、表观遗传、环境及免疫相关因素的组合有关，这些因素改变了脑结构和功能[3]。近几十年来，ASD的患病率显著上升。根据美国疾病控制与预防中心（CDC）2023年的数据，美国约2.76%的8岁儿童被诊断为ASD，全球估计男女比例为3:1[4]、[5]。这一增加可能源于诊断水平提高、意识增强或环境因素，使ASD成为全球性的重大健康挑战[6]。目前ASD的治疗主要包括行为干预、教育干预，有时还辅以药物治疗，旨在减轻症状并改善日常功能[7]、[8]、[9]。药物可能针对焦虑或多动等特定问题，但并不能解决ASD的核心缺陷[10]。药物疗效有限、依赖长期治疗以及缺乏综合解决方案，凸显了开发创新治疗策略的紧迫性[11]。在这方面，间充质干细胞（MSCs）因其独特的再生和免疫调节特性，在医学研究中引起了广泛关注，被视为一种有前景的治疗工具[12]。MSCs来源多样，包括骨髓、脂肪组织、脐带和胎盘等来源，表现出自我更新、分化为多种细胞谱系及释放生物活性分子的能力[13]。这些特性使MSCs能够通过调节免疫反应、减轻神经炎症、保护神经元完整性、促进轴突再生和神经修复来针对ASD的潜在机制[12]、[14]。临床前研究，包括ASD的BTBR小鼠模型研究，表明MSC移植可减少社交缺陷、重复行为和神经炎症标志物[15]、[16]、[17]、[18]。这些效果可能源于MSCs重塑神经微环境、增强海马神经发生以及修复受损神经回路的能力[12]。然而，MSCs的治疗效果取决于细胞来源、递送方式及受体的生理状态等变量[19]。尽管具有潜力，MSCs的临床转化面临诸多挑战。细胞长期培养导致的遗传不稳定性、MSC群体间的变异性、质量保证困难以及最佳组织来源的确定等问题构成了重大障碍[20]、[21]。尤为值得注意的是，MSCs直接成瘤或间接成瘤潜力的问题仍是关键限制[22]。为克服这些障碍，研究人员越来越多地关注MSCs分泌组，特别是细胞外囊泡（EVs），如外泌体和微泡[23]。EVs富含多种生物活性成分——包括蛋白质、microRNAs、信使RNAs和长链非编码RNAs——这些成分能够促进细胞间信号传导并调节复杂的生物学过程[24]、[25]。与MSCs相比，EVs具有更高的稳定性、更低的免疫原性，以及因非细胞性组成而降低了免疫排斥的风险[26]。这些囊泡能够抑制炎症反应、刺激内源性修复机制并增强受损组织中的细胞功能。近期证据表明，MSC来源的EVs，尤其是经鼻腔递送时，可减轻ASD动物模型中的社交障碍、重复行为和神经炎症[27]。在本研究中，MSC来源的细胞外囊泡（MSC-EVs）作为一个总称，涵盖外泌体及其他MSC分泌的囊泡亚型，以确保表述的一致性。本研究旨在探索MSC-EVs在缓解ASD症状和改善临床结局方面的治疗潜力，同时评估其作为标准干预措施的辅助疗法的作用。我们提出，MSC-EVs可能为现有治疗提供一种非侵入性、无细胞的补充方案，带来显著的治疗益处。通过利用EVs独特的生物学特性，这一方法不仅弥补了当前ASD治疗的不足，还为ASD管理中的创新策略奠定了基础。
章节摘要
方法
在本研究的开发和报告过程中，我们完全遵循了更新后的PRISMA 2020清单指南，以确保在呈现方法和结果时的透明度、准确性和全面性[28]。
研究筛选
图1展示了描述文献检索过程的PRISMA流程图。系统检索从PubMed中获得115篇文章，Embase中获得154篇，Scopus中获得156篇，Web of Science中获得158篇，共计583篇文章。在去除313条重复条目后，270篇文章由两名研究人员进行独立筛选。在评估标题和摘要后，258篇出版物因不符合纳入和排除标准而被剔除。
讨论
ASD是一种复杂的神经发育性疾病，以持续的社交沟通和互动困难以及受限和重复性行为倾向为特征[45]。ASD患病率的全球上升，加上其涉及遗传、环境和免疫因素的异质性病因，凸显了对有效治疗策略的迫切需求[46]。目前ASD的治疗主要包括行为干预和药物。
结论
本系统综述和Meta分析提供了初步证据，支持MSC-EVs作为无细胞方法在临床前模型中靶向ASD相关核心行为异常和神经炎症的治疗潜力。汇总结果显示社交能力显著改善和重复行为减少，同时炎症反应得到有利调节，包括促炎因子水平降低和
伦理声明
本研究遵循ARRIVE（动物研究：活体实验报告）指南进行。本研究为基于已发表研究数据的系统综述和Meta分析，不涉及可识别个体水平数据的收集或使用，也不涉及人类受试者的直接参与，因此无需伦理委员会批准。
CRediT作者贡献声明
Mehdi Khaksari：写作 – 审阅与编辑，写作 – 初稿撰写，数据整理。Zahra Jamalpoor：写作 – 审阅与编辑，写作 – 初稿撰写，软件，概念构思。Amir Atashi：写作 – 审阅与编辑，写作 – 初稿撰写，方法论，数据整理。Amir Hossein Aghayan：写作 – 审阅与编辑，写作 – 初稿撰写，验证，方法论，正式分析，数据整理，概念构思。Behzad Garmabi：写作 – 初稿撰写，监督，软件，
致谢
我们衷心感谢Shahroud医科大学、AJA医科大学和Tehran医科大学提供的支持，这些机构为本研究的完成做出了贡献。作者还感谢使用ChatGPT AI和Google Gemini辅助本文的语言润色、语法编辑以及图形摘要的编制。
Tayebeh Mohtashami|Amir Hossein Aghayan|Alireza Masoudi|Amir Atashi|Behzad Garmabi|Zahra Jamalpoor|Mehdi Khaksari
