多重环介导等温扩增联合侧向流动检测技术用于淡水环境中日本血吸虫及中间宿主湖北钉螺的环境DNA同步监测

《Scientific Reports》：Multiplex LAMP-LFA for rapid field-compatible detection of environmental DNA from Schistosoma japonicum and Oncomelania hupensis quadrasi

　　

摘要

本研究开发了一种可适用于现场条件的多重环介导等温扩增联合侧向流动检测技术（mLAMP-LFA），用于同时检测淡水环境中的日本血吸虫及其中间宿主——湖北钉螺，以改善血吸虫病的环境监测工作。mLAMP-LFA 采用菲律宾莱特省阿兰加兰市埃基拉村主要水体 30 个采样点的环境 DNA（eDNA）样本进行评价，采样时间为 2023 年 7 月至 2024 年 3 月间的四次现场调查。该检测技术在不同样本基质和条件下，经 probit 模型推导得出的检测限（LOD₉₅）范围为 57.2 至 194.9 拷贝/反应，对应的 95% 置信区间为 7.7–427.3 至 35.2–1,077.9 拷贝/反应。对选定的非靶标物种未观察到交叉反应。与软体动物学调查相比，mLAMP-LFA 对日本血吸虫（18.5% vs. 1.7%）和湖北钉螺（15.1% vs. 10.9%）均表现出更高的检出率。采用 Gwet's AC1 评估 mLAMP-LFA 与参考方法之间的一致性，结果显示日本血吸虫的一致性较为显著（AC1 = 0.774–0.779），湖北钉螺的一致性为中等至显著（AC1 = 0.538–0.766），所有比较均显示具有统计学显著性的一致性（p < 0.001）。对应的 95% 置信区间分别为日本血吸虫 0.672–0.881、湖北钉螺 0.380–0.870，表明尽管在检测方法和灵敏度方面存在差异，但分子方法与软体动物学方法之间总体具有良好的吻合度。总体而言，mLAMP-LFA 提供了一种快速、可适用于现场且对设备要求较低的多重 eDNA 监测平台，有助于加强血吸虫病的监测工作，并为资源有限的流行地区的靶向防控提供支持。