《Leukemia Research Reports》：Leukocytosis and a
JAK2 mutation: The importance of expertise in somatic variant interpretation
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本病例描述一名患者，表现为慢性白细胞增多伴孤立性嗜酸性粒细胞增多，通过针对骨髓增殖性肿瘤驱动基因突变的二代测序（next generation sequencing, NGS）panel检测发现其携带JAK2 G571S突变。研究人员对颊黏膜细胞样本进行了补充
本病例描述一名患者，表现为慢性白细胞增多伴孤立性嗜酸性粒细胞增多，通过针对骨髓增殖性肿瘤驱动基因突变的二代测序（next generation sequencing, NGS）panel检测发现其携带JAK2 G571S突变。研究人员对颊黏膜细胞样本进行了补充NGS检测，以证明该变异为胚系改变，且不存在其他致病性突变。这一结果促使患者因既往类圆线虫感染而再次接受伊维菌素治疗，其嗜酸性粒细胞增多得到缓解。该病例强调了此前已报道的罕见G571S JAK2突变可能具有良性多态性特征。此外，研究人员的实验结果强调了恰当解读罕见意义不明确变异（variant of uncertain significance, VUS）的重要性，即临床决策应辅以补充遗传学检测，并结合每位患者的临床背景进行综合判断。
**研究背景与意义**
骨髓增殖性肿瘤（myeloproliferative neoplasm, MPN）是以髓系细胞过度增殖为特征的克隆性疾病，JAK2 V617F是常见的驱动突变，但JAK2基因其他区域如G571S的致病性尚不明确。该变异极其罕见，其功能学研究结果不一，既往个例报道又缺乏多基因测序数据，因此难以判断其为致病突变还是良性多态性。正确解读这类罕见变异对临床决策至关重要。本研究通过一例慢性白细胞增多伴嗜酸性粒细胞增多的患者，展示了如何利用辅助基因检测和临床背景来正确解读JAK2 G571S变异，并强调了分子诊断专家在此过程中的核心作用。
研究人员对一名88岁男性退伍军人进行了详细的分子检测。该患者有长期白细胞增多和嗜酸性粒细胞增多，并有类圆线虫感染史。初步MPN panel检测发现JAK2 G571S阳性，但未检出其他已知驱动突变。患者拒绝骨髓活检后，研究人员进一步采集外周血和颊黏膜细胞进行49基因二代测序，结果提示G571S为胚系杂合多态性，且无附加驱动突变。结合重新给予伊维菌素后嗜酸性粒细胞消退，研究结论支持该变异良性多态性的本质，同时强调了辅助基因检测和专家解读在变异意义不明确时的重要性。
**关键技术方法**
本研究为单例回顾性分析，样本来自美国耶鲁大学医学院。研究人员提取患者外周血和颊拭子的基因组DNA，使用涵盖49个髓系肿瘤相关基因的Ampliseq panel构建文库，在Ion Torrent S5平台上进行二代测序（NGS）。序列比对和变异检出以hg19为参考基因组，采用Torrent Suite和Ion Reporter软件完成，并通过COSMIC、dbSNP和Clinvar等数据库对变异进行致病性分类。此外，还对JAK2基因进行了全外显子测序。
**研究结果**
**1. 引言及病例介绍**
患者为88岁男性，出生于波多黎各，有在韩国、德国和巴拿马的军事服役史。因白细胞增多和持续嗜酸性粒细胞增多就诊，嗜酸性粒细胞增多至少自2007年存在。患者曾于2018年因粪类圆线虫感染接受伊维菌素治疗，但嗜酸性粒细胞未改善。体格检查无肺部、心脏疾病，无脾肿大和皮疹，无血液病家族史。外周血涂片显示嗜酸性粒细胞增多，但形态正常。MPN分子panel检测显示JAK2 V617F、BCR::ABL1、FIP1L1::PDGFRA、CALR、MPL及JAK2外显子12均为阴性，而JAK2外显子13 G571S阳性。医生建议骨髓活检，但患者拒绝。
**2. 实验室分子检测方法**
研究人员获取患者外周血和颊黏膜拭子样本，提取基因组DNA后，利用49基因panel（涉及急性髓系白血病、骨髓增生异常综合征和MPN相关基因）制备Ampliseq文库，并在Ion Torrent S5系统上进行NGS测序。随后用Torrent Suite和Ion Reporter软件进行序列分析、变异检出与注释，并参考COSMIC、dbSNP和Clinvar数据库对变异进行分类。同时，对JAK2基因进行全外显子测序。
**3. 结果**
外周血和颊拭子NGS结果显示，JAK2 G571S在两种样本中均被检出，变异等位基因频率（variant allele frequency, VAF）均接近50%，提示该变异为胚系杂合多态性。此外，检测到STAG1 Ala18Val错义变异，其在血和颊细胞中的VAF也约为50%，同样被认为是杂合多态性。还发现TET2 Tyr1255Ter无义变异仅在外周血中检出（VAF=7%），该变异在COSMIC数据库中仅有一次记录，且患者无相应临床表现，故推测来源于潜能未定的克隆性造血（clonal hematopoiesis of indeterminate potential, CHIP）。这些结果不支持MPN的诊断，未发现致病的驱动突变。基于此，患者重新接受了伊维菌素治疗，随后嗜酸性粒细胞完全消退。
**4. 结论**
本研究讨论了JAK2变异在MPN诊断中的重要性。JAK2 V617F是典型的热点突变，而G571S等非热点变异较为罕见，以往研究未能明确其致病性。本病例提供了三项证据支持G571S为良性多态性：其一，该变异同时存在于造血细胞和上皮细胞，呈杂合状态；其二，49个肿瘤相关基因中未检出其他驱动突变；其三，重新抗寄生虫治疗后嗜酸性粒细胞消退。此外，美国分子遗传学学院（American College of Molecular Genetics, ACMG）指南建议临床决策不应仅基于意义不明确的变异（VUS），辅助基因检测有助于避免不必要的侵入性检查。最后，本病例强调了分子诊断和血液病理专家结合患者临床背景解读基因变异的重要性。
总之，研究人员报道了一名伴有嗜酸性粒细胞增多和类圆线虫感染史的患者，其携带JAK2 G571S突变，并确定该突变为罕见多态性。患者的嗜酸性粒细胞增多在重新接受伊维菌素治疗后缓解。该病例提示JAK2 G571S变异很可能不具有致病性，同时凸显了在变异意义不明确时辅助基因检测的价值，以及基因变异解读必须结合适当的临床背景。
