急性缺血性卒中循环血液生物标志物家族的诊断准确性：一项基于原始研究验证的二次分组Meta分析

《Frontiers in Neurology》：Diagnostic accuracy of circulating blood biomarker families in acute ischemic stroke: a secondary grouped meta-analysis with primary-study verification

　　

背景：循环生物标志物可能补充疑似急性缺血性卒中（AIS）早期评估中的临床检查和神经影像，但相关证据涵盖了生物学和分析上异质的检测家族。研究人员将原始分析修订为一项透明的二次分组诊断准确性Meta分析，并核实了所有贡献的原始研究报告。方法：候选研究从两项近期关于急性期蛋白质和游离核酸生物标志物的系统评价、反向引文检索以及截至2026年7月31日的针对性PubMed/MEDLINE更新中获得。原始报告根据预先定义的纳入标准进行核实。生物标志物被重新分类为细胞外染色质/游离DNA、低氧反应、非编码RNA或蛋白质/多标志物检测。当已发表的2×2四格表不可用时，根据敏感性、特异性以及患病/非患病样本量，采用预先指定的取整规则重建四格表细胞。仅当至少有四个独立队列可用时，才使用双变量随机效应模型；少于四个队列的家族采用描述性总结。增加了QUADAS-2、对照谱分析、每队列一个估计值规则以及取整边界敏感性分析。结果：2003年至2025年间发表的17项经核实的原始研究报告贡献了24项原始诊断检测估计值。队列级原始数据集包含17个独立队列。细胞外染色质/游离DNA检测（4个队列）的汇总敏感性为0.712（95% CI 0.454–0.880），特异性为0.796（0.699–0.868），LR⁺为3.50（2.27–5.40），LR^?为0.36（0.17–0.76），诊断比值比（DOR）为9.68（3.39–27.62）。非编码RNA检测（10个队列）的敏感性为0.866（0.829–0.896），特异性为0.922（0.585–0.990），但较宽的特异性和DOR区间表明存在相当大的不确定性。低氧反应和蛋白质/组合证据分别仅包含一个和两个独立队列，因此未进行正式合并。大多数研究采用健康对照双门设计（two-gate designs）和数据驱动的阈值；所有诊断性2×2四格表均需重建。对照、取整、依赖性和逐队列排除分析保留了主要发现的方向，但显示出实质性的不确定性和谱系效应（spectrum effects）。结论：非编码RNA和细胞外染色质/游离DNA检测显示出有前景但方法学上脆弱的诊断信号。由于现实的卒中模拟队列稀少、阈值通常由数据驱动，以及重建细胞和队列内多重检验仍是重要局限性，现有证据不足以支持常规临床实施。需要进行前瞻性单门、模拟富集验证。

1 引言

急性缺血性卒中（AIS）是导致死亡和长期残疾的主要原因，再灌注治疗的获益依赖于快速识别、影像学检查和治疗。尽管神经影像不可替代，但早期诊断可能因轻微神经功能缺损、后循环表现、醒后卒中及常见卒中模拟病而变得复杂。快速、可重复且对临床检查有附加价值的血液检测可能支持分诊或诊断信心，但不应视为CT或MRI的替代品。现有AIS生物标志物文献在生物学和设计上均具有高度异质性。原始稿件将多种miRNA、lncRNA和circRNA测试归为“NETs相关扩展生物标志物”，这一标签暗含了并非所有成分标志物都具备的生物学关系。修订版将这一组重新命名为“非编码RNA生物标志物”，同时将组蛋白、dsDNA和cfDNA检测保留在更窄的细胞外染色质/游离DNA组中。低氧反应生物标志物和蛋白质/多标志物检测则单独处理。本研究明确界定为二次分组诊断准确性Meta分析，而非新开展的系统评价，目标包括比较生物学一致检测家族内的诊断行为、评估对照类型和采样时间的影响、通过QUADAS-2记录偏倚风险，并使用预先指定的敏感性分析评估重建2×2四格表的稳健性。

2 方法

2.1 研究设计与证据来源

本研究为二次分组诊断准确性Meta分析并进行原始研究验证。由于修订前数据库级记录计数无法恢复，研究未追溯性编造PRISMA记录数，而是通过两项锚定系统评价（一项针对急性治疗窗血液蛋白生物标志物，另一项针对游离核酸）重建证据来源路径，随后进行原始报告验证、反向引文检索和截至2026年7月31日的针对性PubMed/MEDLINE更新。研究方案未前瞻性注册，并作为局限性报告。

2.2 针对性检索和来源验证

PubMed/MEDLINE更新结合了AIS或脑梗死、血液/血清/血浆生物标志物、诊断准确性以及候选家族的相关术语。无语言限制。完整检索语法见补充表S1。每份纳入报告的文献标识符、样本量、测试名称、对照人群、采样窗口、敏感性、特异性、AUC和阈值均与原始文章核对。修订版仅纳入能确认原始来源的报告；先前的占位符“UnknownRef46”被解析为Reynolds等人。

2.3 纳入标准

纳入标准要求：成人AIS由临床神经评估联合CT或MRI确诊；评估循环血液、血清、血浆或外周血细胞标志物用于AIS诊断或鉴别诊断；包含非AIS对照组；报告TP、FP、FN、TN或可从敏感性、特异性和组分母重建这些细胞的信息。前瞻性和回顾性诊断队列及病例对照研究均符合条件。排除动物或体外研究、仅组织/血栓检测、仅脑脊液检测、仅预后而无诊断准确性、仅提供AUC而无组特异性准确数据、重复队列且无分析学上不同检测，以及无法验证原始来源或分母的记录。

2.4 分析单位与多测试处理

原始数据集包含来自多个队列的多种测试或亚型估计值。若将之视为独立研究将低估不确定性。因此区分原始报告、独立队列和诊断测试估计值。主要队列级分析每队列保留一个预先指定的估计值：优先选择文章指定的主要测试或验证面板；独立复制队列优先于发现队列；面板与其组成测试分开分析。对于Tian等人，疾病亚型计数合并，共享对照组仅计一次。伴随标志物保留在完整提取表中，仅用于臂级敏感性分析。

2.5 生物标志物家族分类

根据明确的生物学和分析标准分类。细胞外染色质/游离DNA家族包括循环组蛋白H3.1、dsDNA、TERT靶向cfDNA和β-珠蛋白cfDNA。低氧反应家族包括HIF-1alpha及来自同一队列的相关miR-210测试。非编码RNA家族包括miRNA、lncRNA和circRNA，无论其是否具有直接NET关系。蛋白质/多标志物家族包括H-FABP、S100B和蛋白质面板算法。Cit-H3预后关联不视为诊断测试准确度数据，移至补充预后分析。

2.6 诊断2×2表的重建

没有纳入报告为最终选择阈值提供可直接提取的完整2×2表。当敏感性（Se）、特异性（Sp）、AIS数（N_AIS）和非AIS数（N_non-AIS）可用时，按TP=round(Se×N_AIS)、FN=N_AIS?TP、TN=round(Sp×N_non-AIS)、FP=N_non-AIS?TN重建细胞。重建细胞通过重新计算敏感性和特异性进行核对。由于排除重建数据将导致无可分析的诊断队列，故以预先指定的取整边界敏感性分析取代排除分析，采用向下取整、最近整数和向上取整规则。每个估计值的来源字段在补充表S2中提供。

2.7 偏倚风险评估

使用QUADAS-2评估偏倚风险和适用性，涵盖患者选择、待评价指标、参考标准和流程/时间域。患者选择风险在选定的双门病例对照设计中评为高风险，当连续或随机入组未记录时评为不清楚。当诊断阈值从同一ROC数据集选择而非预先指定时，待评价指标风险评为高风险。CT/MRI支持的临床诊断被认为可接受的参考标准。研究级判断和书面理由见补充表S4及图1和补充图S1。

2.8 统计分析

对于至少四个独立队列的家族，在logit尺度上采用双变量随机效应模型联合合成敏感性和特异性。汇总LR⁺、LR^?和DOR由