miR-6511b-3p靶向BCL2驱动风湿性心脏病进展及BCL2工程化内皮祖细胞外泌体的心肌保护机制研究

《Stem Cell Research & Therapy》：BCL2-engineered endothelial progenitor cell-derived exosomes attenuate rheumatic heart disease through the miR-6511b-3p/Bcl-2 axis

　　**摘要****背景**风湿性心脏病（RHD）是一种自身免疫性心血管疾病，缺乏有效的早期诊断生物标志物，其发病机制尚未完全阐明。微小RNA（miRNA）通过靶向参与凋亡、炎症和组织重塑的特定基因来调控心血管疾病的发展进程。失调的miRNA–靶基因网络可能参与RHD的发生发展。内皮祖细胞（EPC）来源的外泌体是miRNA转运、基因递送和组织修复的重要载体。本研究旨在筛选与RHD相关的关键miRNAs，并探讨*BCL2*工程化EPC来源外泌体（EPC^BCL2-Exo）在RHD中的治疗作用及机制。**方法**通过外周血miRNA测序筛选RHD相关外泌体miRNAs，并在独立的RHD队列中与健康对照组相比，通过外泌体RNA逆转录定量PCR（RT-qPCR）进行验证。采用模拟物/抑制剂在细胞模型中通过CCK-8、流式细胞术、RT-qPCR和Western blot对代表性差异表达miRNAs进行功能评估，并通过双荧光素酶报告基因实验确认靶基因。通过慢病毒构建*BCL2*过表达的EPCs，通过超速离心分离工程化外泌体并进行表征。建立Lewis大鼠RHD模型，通过超声心动图和病理组织学评估尾静脉注射工程化外泌体的治疗效果。**结果**鉴定并验证了外泌体miR-6511b-3p在RHD患者中显著上调，其升高与*BCL2*表达呈负相关。双荧光素酶实验确认*BCL2*是miR-6511b-3p的直接靶基因，miR-6511b-3p通过抑制*BCL2*促进心肌细胞凋亡。功能学研究表明，miR-6511b-3p过表达降低了细胞活力并增强了凋亡，通过恢复*BCL2*可部分逆转该效应。*BCL2*工程化EPC来源外泌体通过改善外泌体摄取、细胞活力和迁移，同时抑制凋亡信号通路，增强了心肌细胞保护。体外研究表明，EPC^BCL2-Exo恢复了细胞活力，上调了Bcl-2，下调了Bax，并通过减少IL-6和TGF-β1的分泌减轻炎症/纤维化反应，抑制TGF-β/Smad3通路，降低α-SMA和胶原I/III的表达。免疫荧光证实α-SMA阳性纤维化转化减少。体内研究表明，EPC^BCL2-Exo改善了心脏功能，抑制了心肌细胞凋亡，减轻了瓣膜和心肌重塑，减少了纤维化和炎症。miR-6511b-3p/Bcl-2轴通过凋亡和纤维化驱动RHD发展，而EPC^BCL2-Exo通过靶向该通路发挥心肌保护作用。**结论**在RHD中，miR-6511b-3p水平升高伴随*BCL2*下调，这可加速心肌细胞凋亡和炎症反应，从而驱动疾病进展。EPC^BCL2-Exo可通过改善心脏功能、减少瓣膜纤维化和促进心肌修复来调节miR-6511b-3p/Bcl-2凋亡通路。该策略为RHD的早期干预和精准治疗提供了新的理论依据和治疗途径。