槐果碱通过抑制MEK/ERK和p38 MAPK信号通路减轻TGF-β诱导的视网膜色素上皮间质上皮转化及视网膜下纤维化

《Journal of Translational Medicine》：Sophocarpine, a bioactive alkaloid derived from Sophora flavescens, alleviates subretinal fibrosis by suppressing epithelial-mesenchymal transition

　　摘要背景视网膜下纤维化（SF）是新生血管性年龄相关性黄斑变性（nAMD）的一种威胁视力的并发症，目前尚无有效治疗方法。由TGF-β信号通路驱动的视网膜色素上皮细胞（RPE）的间质上皮转化（EMT）是SF的关键驱动因素。槐果碱（SOP）在其他器官中显示出抗纤维化的潜力，但其在眼纤维化中的作用尚不清楚。目的评估SOP对SF的治疗效果，并阐明其是否抑制TGF-β诱导的RPE-EMT。方法通过视网膜电图和组织学检查评估C57BL/6J小鼠玻璃体腔注射SOP的视网膜安全性。采用激光诱导脉络膜新生血管（CNV）小鼠模型评估SOP对SF的体内作用。体外方面，建立ARPE-19和iPSC-RPE细胞的TGF-β1诱导的EMT模型。通过qPCR、Western blot和免疫荧光分析EMT标志物。功能实验包括划痕愈合试验、Transwell迁移试验和凝胶收缩试验。通过RNA-seq和分子对接探索机制。结果玻璃体腔注射SOP（200 μM）未检测到急性视网膜毒性。SOP在激光诱导的小鼠中减少了CNV病灶大小、胶原沉积以及α-SMA/RPE65的共定位。体外实验中，SOP抑制了TGF-β1诱导的纤连蛋白、α-SMA和波形蛋白的上调，保留了ZO-1，并减少了RPE细胞的迁移和收缩。机制上，SOP优先减少了MEK/ERK和p38 MAPK的磷酸化，而未影响Smad2/3。分子对接和分子动力学模拟预测SOP与MEK1、MEK2和ERK2结合。结论SOP减轻了实验性SF，并抑制了TGF-β1诱导的RPE细胞中类EMT样变化，这与MEK/ERK和p38 MAPK信号通路减弱相关。SOP代表了一个有前景的临床前候选药物，值得进一步研究。