《Head and Neck Pathology》：Claudin 18 Immunohistochemistry Expression in Salivary Gland Neoplasms: Limited Potential as a Therapeutic Biomarker
编辑推荐：
**目的**：Claudin 18（CLDN18）是一种维持上皮细胞紧密连接完整性的蛋白质。近年来，抗Claudin 18.2靶向疗法的研发为胃癌中Claudin 18表达阳性患者带来了生存获益。本研究旨在探讨多种良恶性唾液腺肿瘤中是否存在Claudin
**目的**：Claudin 18（CLDN18）是一种维持上皮细胞紧密连接完整性的蛋白质。近年来，抗Claudin 18.2靶向疗法的研发为胃癌中Claudin 18表达阳性患者带来了生存获益。本研究旨在探讨多种良恶性唾液腺肿瘤中是否存在Claudin 18表达。
**方法**：本初步研究纳入48例不同亚型的唾液腺肿瘤病例。收集了包括肿瘤部位、分级和分期（如适用）在内的辅助数据。对每例病例具有代表性的肿瘤组织块进行Claudin 18免疫组化（immunohistochemistry，IHC）染色。
**结果**：在本初步研究中，良性和恶性唾液腺肿瘤均未见异常的Claudin 18表达。
**结论**：在本队列所代表的肿瘤类型、部位、分级和分期中，CLDN18表达均一致缺失。所有病例均无表达，表明Claudin 18在唾液腺肿瘤患者中作为治疗性标志物的潜力有限。本研究为唾液腺肿瘤中Claudin 18表达极为有限的文献资料做出了贡献。
**论文解读**
**一、研究背景与目的**
唾液腺恶性肿瘤是头颈部肿瘤中的罕见实体，约占所有头颈癌的1%–5%。此类肿瘤的治疗因病例而异，推荐指南涵盖多种手术和全身性治疗方案。在特定病例中，可针对雄激素受体（androgen receptor，AR）、人表皮生长因子受体2（Human Epidermal Growth Factor Receptor 2，HER2）和神经营养性肌球蛋白受体激酶（Neurotrophic Tropomyosin Receptor Kinases，NTRK）等生物标志物采用靶向治疗，并已取得积极疗效。然而，这些生物标志物通常仅在有限的唾液腺癌亚群中表达，导致许多肿瘤患者无法接受靶向干预。因此，持续推进唾液腺肿瘤的分子谱分析和生物标志物表达研究，对改善患者治疗选择至关重要。
Claudin 18（CLDN18）是由CLDN18基因编码的蛋白质，负责维持上皮细胞间紧密连接的完整性。CLDN18基因位于染色体3q22，包含六个外显子和五个内含子。通过选择性剪接产生两种蛋白亚型：CLDN18.1和CLDN18.2。CLDN18.1主要表达于肺组织，而Claudin 18.2亚型表达于良性胃上皮，其在恶性转化过程中暴露于肿瘤细胞表面，使之成为新兴抗Claudin 18.2疗法的靶点。这些新型药物已被证实可改善晚期或不可切除胃癌患者的总生存期和无进展生存期。
鉴于Claudin 18在胃癌中的成功应用，研究人员推测具有类似腺体或分泌特性的唾液腺组织来源肿瘤可能存在Claudin 18的异常表达，并可能作为靶向治疗的生物标志物。研究人员特别关注黏液表皮样癌（mucoepidermoid carcinoma，MEC），因为此类肿瘤已被证明可表达多种其他claudin蛋白，且其表型异质性为评估Claudin 18在不同细胞成分中的潜在表达差异提供了机会。因此，本初步研究的目的是调查唾液腺肿瘤中Claudin 18的表达有无，以确定其作为靶向治疗生物标志物的潜力。
**二、研究设计与主要技术方法**
本研究经机构审查委员会（Institutional Review Board，IRB）批准（方案编号STUDY00027211），查询了单个机构2022年1月至2026年1月期间的唾液腺肿瘤病例，并按肿瘤类型分层。每种肿瘤类型纳入最近连续的五例病例，罕见类型不足五例者全部纳入。由于黏液表皮样癌的表型变异性和较高的Claudin 18表达预检概率，共纳入九例。最终共48例唾液腺肿瘤纳入分析，包括腮腺41例、颌下腺4例、小涎腺（唇和腭）3例。
免疫组化（immunohistochemistry，IHC）染色使用CLDN18抗体（克隆号43-14A），在Ventana Discovery Ultra平台上采用Optiview检测试剂盒（Roche #950-500）进行。该抗体可同时检测Claudin 18.1和18.2两种亚型。以正常胃组织作为阳性对照。染色结果由两位研究者独立盲法判读，完全一致。采用Brust等人描述的Claudin 18免疫组化解读方法：染色强度评为0（无）、1（弱）、2（中）或3（强）；阳性细胞百分比评为0（0%）、1（<10%）、2（10%–50%）、3（51%–80%）或4（>80%）。强度评分与百分比评分相乘得到最终免疫反应评分（immunoreactivity score，IRS），范围从0（阴性）到12（强阳性）。
**三、研究结果**
**黏液表皮样癌中的表达情况**：七例为低级别，两例为中级别。所有黏液表皮样癌均未显示Claudin 18表达，IRS为0。
**腺样囊性癌中的表达情况**：大多数为低级别，以管状和筛状结构为主，仅一例为实体结构，同样均为阴性。
**癌外多形性腺瘤中的表达情况**：三例癌外多形性腺瘤均为唾液腺导管癌，Claudin 18表达阴性。
**其他良恶性肿瘤中的表达情况**：所有良性及恶性唾液腺肿瘤组织均未见Claudin 18免疫组化染色阳性，周围非肿瘤性唾液腺组织亦无染色。所有病例IRS均为0。一例沃辛瘤（Warthin tumor）上皮细胞出现颗粒状胞浆染色，但被判定为阴性，因为非膜性染色不符合临床相关阳性标准。
值得注意的是，根据临床验证的伴随诊断标准（选择Zolbetuximab治疗患者需至少75%肿瘤细胞出现中至强度膜性染色），本队列即使采用此标准，整体临床判读结果亦不会改变，因为无任何病例显示所需的膜性染色模式。
**四、讨论与结论**
已知的claudin蛋白与具有管状分化的器官中紧密连接的完整性直接相关。在胚胎发生过程中，claudins 1、3、4、5、7和11在不同时间点表达，被推测参与成熟唾液腺组织的形态学分化。在成人中，claudins 1、3、4、5和7在黏液表皮样癌中表达。但Claudin 18在唾液腺肿瘤中的表达，已有文献中仅一项研究报道，该研究显示Claudin 18.2在6%的唾液腺癌中略有表达（包括黏液表皮样癌、腺泡细胞癌和腺样囊性癌），但免疫反应评分小于1，总体被视为阴性表型。本研究结果与此一致，且将评估范围扩展至更广泛的良性和恶性肿瘤类型，进一步证明Claudin 18在唾液腺肿瘤中表达始终有限。
研究人员提出一种可能解释：尽管唾液腺和胃黏膜均产生黏蛋白，但二者代表不同的分化程序。唾液腺主要表达MUC5B和MUC7，而胃上皮主要表达MUC5AC和MUC6。Bian等人的研究发现，肺浸润性黏液腺癌中Claudin 18表达与MUC5AC和MUC6表达显著正相关。虽然这一发现是来自其他器官系统的推断，但上皮表型的差异可能反映潜在的谱系特异性基因表达和细胞分化途径的差异。由于Claudin 18与胃上皮分化密切相关，唾液腺肿瘤中缺乏表达可能表明唾液腺黏液分化并不模拟驱动胃癌中Claudin 18表达的分子程序。
综上，本研究48例唾液腺肿瘤无一例显示阳性Claudin 18染色（0%；95%CI，0–7.4%），但有限队列中缺乏阳性病例不应解读为真实患病率为0%。研究结果表明Claudin 18在唾液腺肿瘤中表达稀少，但不能排除本研究未涉及的罕见亚型存在表达。然而，在多种较常见的唾液腺肿瘤亚型中一致阴性的结果，进一步支持了已有有限数据所提示的结论：Claudin 18不太可能作为唾液腺肿瘤的可行治疗靶点。
