NSUN2通过m?C修饰稳定PTK7 mRNA驱动肝星状细胞活化促进肝纤维化

《Cell Biology and Toxicology》：The NSUN2-ALYREF/YBX1-PTK7 axis drives hepatic stellate cell activation in liver fibrosis through m5C mRNA modification

　　## 摘要### 背景肝纤维化是由活化的肝星状细胞（HSCs）过度产生和沉积细胞外基质（ECM）所致。NSUN2是负责mRNA m?C修饰的主要甲基转移酶。ALYREF和YBX1是识别m?C修饰mRNA的结合蛋白。本研究阐明NSUN2-m?C-ALYREF/YBX1轴在HSC活化中的功能意义。### 方法通过免疫组织化学、Western blot和免疫荧光染色检测多个纤维化小鼠模型的肝组织、TGF-β1刺激的LX-2人HSC及小鼠原代HSC中NSUN2、ALYREF、YBX1以及m?C修饰的表达。使用特异性shRNA抑制或在LX-2细胞中过表达NSUN2、ALYREF和YBX1，通过Western blot评估HSC活化标志物，通过Transwell实验检测细胞迁移能力。采用斑点杂交法评估m?C修饰水平。利用m?C亚硫酸盐测序和转录组分析鉴定NSUN2调控的m?C修饰基因。通过qPCR、RIP-qPCR、RNA稳定性实验和功能验证鉴定NSUN2、ALYREF和YBX1的潜在调控基因。### 结果在高脂饮食（HFD）小鼠、四氯化碳（CCl?）处理小鼠、日本血吸虫（*S. japonicum*）感染小鼠及活化HSC的肝组织中，NSUN2、ALYREF和YBX1的表达以及m?C修饰水平均升高。抑制NSUN2、ALYREF和YBX1可抑制HSC活化。NSUN2通过促进m?C修饰并稳定*PTK7* mRNA，从而增强PTK7蛋白表达和HSC活化。NSUN2对PTK7表达的调控依赖于ALYREF和YBX1。### 结论NSUN2-ALYREF/YBX1-PTK7轴通过m?C mRNA修饰驱动HSC活化，揭示了调控HSC生物学的一种此前未被认识的表观遗传机制。