基于2A自切割肽策略构建格特病毒反向遗传学系统及重组报告病毒GETV-2A/EGFP

《Cellular and Molecular Life Sciences》：Comparison and characterization of construction strategies for Getah virus infectious clones with stable, high-level expression of reporter gene

　　

摘要

格特病毒（GETV）是一种蚊媒病毒，由于近期的暴发及其毒力增强的潜力，已成为对动物健康和公共安全的重要威胁。迫切需要全面了解 GETV 发病机制背后的分子机制，以指导有效预防和治疗干预措施的开发。为此，建立一种稳健且高效的 GETV 反向遗传学系统至关重要。在本研究中，我们基于先前分离的减毒株 GETV-BJ0304，采用无缝克隆方法快速构建了 GETV 全长感染性克隆。此外，我们比较了甲病毒反向遗传学中常用的报告基因整合策略，特别是利用 2A 自切割肽和亚基因组启动子的策略。实验结果证实，对于减毒株骨架，采用 2A 自切割肽驱动报告基因的插入策略具有高效性和稳定性。本研究构建的重组报告病毒 GETV-2A/EGFP 表现出高感染效率和遗传稳定性，可作为深入分析 GETV 复制和致病机制以及探索辅助宿主抵抗 GETV 侵袭的新策略的关键技术平台。