越南中部家猫中猫泛白细胞减少症病毒与犬细小病毒的分子检测及VP2基因特征分析

《International Journal of Molecular Sciences》：Molecular Detection and VP2 Characterization of Feline and Canine Parvoviruses in Domestic Cats in Central Vietnam

　　

本研究于2023年7月至2025年7月期间，在越南中部多乐省和嘉莱省采集了269份来自家猫的粪便样本，样本涵盖有临床症状和无临床症状的个体。采用聚合酶链式反应（PCR）方法检测所获样本中的猫泛白细胞减少症病毒（FPV）DNA。对阳性样本随机选取并进行VP2基因全长的Sanger法测序。在269份样本中，共检出25份（9.29%）猫泛白细胞减少症病毒DNA阳性。6月龄以下猫的病毒DNA阳性率为17.65%（15/85），显著高于6–12月龄及12月龄以上猫的阳性率。成功获得7条完整VP2序列，其核苷酸一致性为98.23%–100%。与GenBank中其他序列比对显示，当前7条越南序列与来自中国、意大利和西班牙的病毒株具有最高的核苷酸一致性，范围为99.08%–99.94%。基于完整VP2基因序列构建的系统发育分析表明，获得的6条越南序列属于猫泛白细胞减少症病毒（FPV）谱系，并分为数个分支，与中国、意大利和西班牙的病毒株亲缘关系密切。其余1条序列被鉴定为犬细小病毒（CPV），其与先前越南CPV-2c型及中国毒株具有遗传相关性。在本研究的越南FPV/CPV毒株VP2蛋白中检测到26个负选择位点。

越南中部家猫中猫泛白细胞减少症病毒与犬细小病毒的分子检测及VP2基因特征：研究解读

研究背景与问题

猫泛白细胞减少症病毒（feline panleukopenia virus, FPV）是细小病毒科（Parvoviridae）中一种无包膜的小型单链DNA病毒，可感染家猫及多种猫科动物，也能感染浣熊、水貂等非猫科宿主。FPV与犬细小病毒（canine parvovirus, CPV）在基因组结构、衣壳组成和免疫学特性上高度相似，CPV被分为2a、2b和2c等抗原型，且同样可以感染猫。VP2蛋白由第四个开放阅读框编码，约占病毒衣壳蛋白总量的90%，在决定宿主特异性、诱导中和抗体和病毒进化中发挥关键作用，因此VP2基因常被用于分子流行病学研究和亚单位疫苗开发。虽然越南已有细小病毒的相关报道，但有关FPV和CPV的分子数据仍然有限，尤其是越南中部地区的遗传特征和进化关系尚未得到系统阐明。为此，研究人员基于VP2序列对越南中部家猫中FPV和CPV的分子特征进行了系统分析，以填补该区域分子流行病学的空白。

研究内容与结论

研究人员于2023年7月至2025年7月在越南中部多乐省和嘉莱省采集了269份家猫粪便样本，样本来自有或无胃肠道临床症状的个体。通过PCR检测FPV DNA，对阳性样本进行VP2基因全长测序，并结合GenBank参考序列进行遗传距离、系统发育和选择压力分析。结果显示，FPV DNA总体检出率为9.29%（25/269），其中多乐省为5.16%，嘉莱省为25%，差异具有统计学意义（p < 0.001）；6月龄以下猫的阳性率（17.65%）显著高于6–12月龄猫（4.24%，p = 0.003），但与12月龄以上猫（7.58%）相比差异不显著；不同品种、性别和健康状况间的检出率无显著差异。系统发育分析表明，7条越南毒株中6条属于FPV谱系，分为若干小分支，与中国、意大利和西班牙毒株亲缘较近；另1条毒株属于CPV-2c谱系，与越南既往CPV-2c及中国毒株密切相关。选择压力分析检测到VP2蛋白上存在26个负选择位点，未发现正选择位点。该研究首次提供了越南中部多乐省和嘉莱省家猫中FPV/CPV的分子特征数据，对理解细小病毒在该地区的遗传多样性和进化动态具有重要意义。

主要关键技术方法

本研究采用了常规PCR法对粪便样本中的FPV DNA进行筛查，引物靶向VP2基因225 bp片段；对阳性样本使用三对引物分别扩增VP2基因的重叠片段（708 bp、719 bp和569 bp），通过Sanger法双向测序拼接获得全长VP2序列。利用GENETYX和BLAST进行序列比对，使用MEGA 7以最大似然法构建系统发育树，采用Tamura 3-parameter + G + I模型和1000次自举检验评估节点支持度。选择压力分析采用Datamonkey平台的FUBAR方法。样本队列来源于越南中部多乐省和嘉莱省2023–2025年期间采集的269份家猫粪便样本。

研究结果分述

2.1 PCR鉴定细小病毒基因组
研究人员采用常规PCR检测269份样本，总体阳性率为9.29%。多乐省与嘉莱省的检出率存在显著差异（p < 0.001）。按年龄分组，6月龄以下猫的阳性率（17.65%）显著高于6–12月龄猫（4.24%，p = 0.003），但与12月龄以上猫（7.58%）差异不显著。品种、性别和健康状态之间无显著差异。

2.2 越南细小病毒毒株VP2基因全长分析
对7份阳性样本进行VP2全长测序，所得序列长度均为1755 bp。7条越南毒株间的核苷酸一致性为98.23%–100%，其中FPV-334/2024、FPV-340/2024和FPV-361/2025完全相同；蛋白水平的一致性为98.22%–100%。与GenBank参考序列比较，FPV-343/2024和FPV-351/2025与中国2020年报道的JSYZ-122毒株一致性最高（99.77%）；FPV-334/2024、FPV-340/2024和FPV-361/2025与中国2019年报道的YZ2019-025毒株一致性最高（99.94%）；FPV-465/2025与意大利2008年报道的Felocell疫苗株一致性最高（99.85%）；CPV-455/2025与中国2022年报道的QD-201毒株一致性最高（99.25%）。

2.3 VP2基因系统发育分析
基于完整VP2基因构建的系统发育树显示，6条越南FPV分离株在FPV群内形成3个独立小分支，均与来自中国、西班牙等地的毒株聚在一起；CPV-455/2025则位于CPV群中，属于CPV-2c谱系，与中国及越南既往报道的CPV毒株聚于同一分支。部分内部节点的自展支持率处于低至中等水平，因此这些关系应理解为遗传相关性而非确定的进化关系。

2.4 VP2蛋白预测氨基酸序列分析
7条毒株的VP2蛋白均为584个氨基酸。所有毒株的五重β-折叠区（aa 152–169）高度保守，但在N端、Loop 1–Loop 4和C端存在多个氨基酸替换。所有毒株第101位均为苏氨酸（T），第122位为天冬酰胺（N），第236位为苏氨酸（T），第237位为天冬氨酸（D），第299位为甘氨酸（G）。FPV-343/2024、FPV-351/2025、CPV-455/2025和FPV-465/2025在第91位为丙氨酸（A），而FPV-334/2024、FPV-340/2024和FPV-361/2025为丝氨酸（S）。4条毒株第232位为缬氨酸（V），CPV-455/2025和FPV-465/2025为异亮氨酸（I）。

2.5 VP2蛋白选择压力分析
选择压力分析显示，所分析的越南FPV分离株VP2蛋白中检测到26个负选择位点，后验概率均大于0.9；未检测到正选择位点。

讨论与结论总结

讨论部分指出，本研究中6月龄以下猫的高阳性率与既往报道的3–5月龄幼猫易感性一致，但该关联仅基于单因素分析，未校正省份等混杂因素，需谨慎解读。疫苗接种史缺失使得无法区分自然感染与疫苗株排毒或疫苗失效。虽然病毒DNA在健康猫中也有检出（8.02%），但横断面分子检测不能据此推断存在活动性亚临床排毒。系统发育分析显示越南毒株与中国毒株关系密切，但有限的样本量和缺乏流行病学关联数据无法确定跨境传播，遗传相似性可能反映共同祖先、病毒广泛传播、采样偏倚或动物移动。FPV-465/2025与疫苗株聚在一起，但系统发育分析不能确定其是否为疫苗来源，也不应解释为疫苗失效。VP2蛋白的I101T和A91S等氨基酸替换可能影响受体结合区构象和中和抗体识别，而Loop 4区域高度保守。选择压力分析发现26个负选择位点，其中5个位点位于已知的B细胞表位或强信号表位区域，提示VP2基因在这些区域性FPV毒株中可能受到严格纯化选择，但FUBAR分析基于有限序列，结果应视为初步发现。

研究结论部分指出，总体上，该研究首次提供了2025年越南中部多乐省和嘉莱省家猫中FPV/CPV的分子特征，并对该地区流行的FPV/CPV毒株进行了详细的分子表征。研究为推进细小病毒进化研究提供了有价值的数据，并强调了遗传学方法在理解病毒多样性中的关键作用。