《Cancers》：Association of Preoperative Circulating Hsp70 Levels with Event-Free Survival in Thoracic Oncology
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摘要翻译：目标/背景：热休克蛋白70（Hsp70）在恶性肿瘤中经常过度表达并释放，且与肿瘤侵袭性和治疗耐药性相关。虽然血液中细胞外Hsp70（eHsp70）水平升高已被证实与不良肿瘤特征相关，但其在长期随访背景下的预后意义尚未得到充分分析。本研究的主要目的是探
摘要翻译：目标/背景：热休克蛋白70（Hsp70）在恶性肿瘤中经常过度表达并释放，且与肿瘤侵袭性和治疗耐药性相关。虽然血液中细胞外Hsp70（eHsp70）水平升高已被证实与不良肿瘤特征相关，但其在长期随访背景下的预后意义尚未得到充分分析。本研究的主要目的是探讨术前循环eHsp70水平与接受胸外科手术的非小细胞肺癌（NSCLC）患者后续无事件生存期（EFS）之间的预后关联。来自其他原发肿瘤的肺转移患者作为探索性亚组进行分析。方法：在一项回顾性研究中，研究人员探讨了恶性胸部疾病患者eHsp70水平与临床结局及无事件生存期之间的关联。结果：共纳入76例因非小细胞肺癌（NSCLC）或其他原发肿瘤肺转移而接受胸外科手术的患者，并对其疾病进展、转移或死亡情况进行随访。发生不良临床事件的患者术前eHsp70水平显著高于无事件患者（中位数194.3 ng/mL [四分位距(IQR) 19.9–493.0] vs. 27.8 ng/mL [IQR 14.3–53.4]，p = 0.0064）。受试者工作特征（ROC）分析显示，在总体队列中具有中等区分能力（曲线下面积(AUC) 0.68，95%置信区间(CI) 0.55–0.81），其中NSCLC患者的AUC为0.72（95% CI 0.56–0.88），肺转移患者的AUC为0.59（95% CI 0.34–0.83）。在NSCLC患者中，术前eHsp70水平升高与显著较短的无事件生存期相关（log-rank p < 0.0001）。在仅限于NSCLC患者的多变量Cox回归分析中，经肿瘤分期、年龄和性别校正后，eHsp70仍与较短的无事件生存期独立相关（风险比(HR) 1.33，95% CI 1.07–1.65，p = 0.010）。结论：这些研究结果表明，循环eHsp70可能对NSCLC患者具有预后意义。然而，在确立其临床效用之前，仍需在更大规模且独立的队列中进行前瞻性验证。
论文解读
**一、研究背景与现存问题**
在胸部肿瘤学领域，寻找可靠的血液生物标志物用于患者风险分层和疾病监测，一直是尚未满足的临床需求。尽管肿瘤分期等既有的临床病理因素能够提供重要的预后信息，但仍有必要发现新的生物标志物，以更精准地识别复发或疾病进展风险较高的患者。热休克蛋白70（Hsp70）是一种进化上高度保守的应激诱导型分子伴侣，其主要功能是维持蛋白质稳态并辅助蛋白质折叠。Hsp70在多种肿瘤类型中均呈高表达，不仅定位于肿瘤细胞胞浆，还高密度表达于肿瘤细胞质膜表面，而在正常细胞膜上则不表达。此外，Hsp70可以被释放至细胞外，以游离分子形式或与脂质微囊泡结合的形式存在于血液中，称为细胞外Hsp70（eHsp70）。大量研究表明，Hsp70过表达与肿瘤侵袭性、治疗耐药及不良临床结局相关。然而，关于术前eHsp70水平对胸部恶性肿瘤患者长期预后影响的资料仍然有限。为此，研究人员开展了一项回顾性研究，旨在探讨术前循环eHsp70水平与非小细胞肺癌（NSCLC）患者胸外科手术后无事件生存期（EFS）之间的关联，并将其他原发肿瘤的肺转移患者作为探索性亚组纳入分析。
**二、研究内容与主要发现**
研究人员对76例接受胸外科手术的患者进行了回顾性随访分析，其中包含53例NSCLC患者和23例肺转移患者。术前1至2天采集血液样本并测定eHsp70水平，术后进行中长期间歇性肿瘤学常规随访，以疾病进展、新发转移或死亡作为研究终点。结果显示，在NSCLC患者中，发生不良临床事件的患者术前eHsp70水平显著高于无事件患者（中位数236.9 ng/mL vs. 27.0 ng/mL，p = 0.0084）；受试者工作特征（ROC）曲线分析显示，eHsp70对不良结局具有一定区分能力（整体队列AUC 0.68，NSCLC队列AUC 0.72）。Kaplan–Meier生存分析表明，术前eHsp70水平高于最佳截断值（168.86 ng/mL）的NSCLC患者，其无事件生存期显著缩短（log-rank p < 0.0001）。在多变量Cox回归分析中，经肿瘤分期、年龄和性别校正后，eHsp70水平每增加一倍，不良事件风险增加33%（风险比HR 1.33，95% CI 1.07–1.65，p = 0.010），提示eHsp70可能提供超越传统分期的额外预后信息。相比之下，在肺转移患者亚组中，事件组与无事件组之间的eHsp70水平无显著差异（p = 0.5083），且eHsp70与无事件生存期之间亦无统计学显著关联（log-rank p = 0.0804）。上述发现提示，循环eHsp70在NSCLC中可能具有预后标志物的潜力，但其临床推广仍需更大规模的前瞻性队列验证。
**三、关键技术方法**
本研究为单中心回顾性队列研究，样本来源于德国慕尼黑工业大学医学院伦理委员会批准的前期研究（伦理审批号：2403/09和2428/09），共纳入76例患者。血液样本于术前1至2天在非空腹条件下采集，EDTA抗凝后离心取血浆，?80°C保存，冻融不超过一次。血浆eHsp70水平采用Hsp70-exo夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）检测。统计学方法包括Wilcoxon秩和检验、ROC曲线分析（Youden指数确定截断值）、Kaplan–Meier生存分析（log-rank检验）以及Cox比例风险回归模型，eHsp70经log2转换后作为连续变量纳入模型，统计软件为R-Studio 4.5.2。
**四、研究结果**
*4.1 患者特征*
共76例患者纳入分析，其中NSCLC 53例（I期19例、II期11例、III期13例、IV期10例），肺转移23例（原发肿瘤以结直肠癌最多，共5例）。队列包含34名女性和42名男性，平均年龄73岁。eHsp70水平于2021至2023年间测定，术后随访数据追踪至投稿时。
*4.2 Hsp70与临床结局的关联*
在NSCLC队列中，发生进展、转移或死亡的患者术前eHsp70水平显著高于无事件患者（236.9 ng/mL [IQR 28.7–464.4] vs. 27.0 ng/mL [IQR 13.1–55.4]；p = 0.0084）。而在肺转移队列中，有事件组与无事件组之间的eHsp70水平差异无统计学意义（68.3 ng/mL [IQR 19.9–580.5] vs. 28.6 ng/mL [IQR 22.9–39.3]；p = 0.5083）。对整体队列的ROC分析显示，eHsp70对不良临床结局的区分能力为中等水平（AUC 0.68，95% CI 0.55–0.81）；NSCLC亚组的AUC为0.72（95% CI 0.56–0.88），最优截断值为168.86 ng/mL，敏感性60.0%、特异性87.9%；肺转移亚组的AUC为0.59（95% CI 0.34–0.83），区分能力有限。Kaplan–Meier分析显示，NSCLC患者中eHsp70升高者无事件生存期显著短于eHsp70较低者（log-rank p < 0.0001）；肺转移患者中，不同eHsp70组之间的无事件生存期无显著差异（log-rank p = 0.0804）。在整体队列的单变量Cox分析中，eHsp70浓度每增加一倍与不良事件风险增加25%相关（HR 1.25，95% CI 1.09–1.44，p = 0.002）。在NSCLC亚组多变量Cox回归模型中，校正分期、年龄和性别后，eHsp70每增加一倍仍使不良事件风险增加33%（HR 1.33，95% CI 1.07–1.65，p = 0.010），而分期、年龄和性别均未显示独立关联。
**五、讨论与结论**
讨论部分指出，eHsp70水平升高与NSCLC患者较短生存期之间的关联具有生物学合理性。Hsp70除分子伴侣功能外，还可通过稳定促肿瘤生长蛋白、抑制细胞凋亡通路、促进上皮-间质转化和血管浸润等方式支持肿瘤细胞存活与转移。活性肿瘤细胞能够主动释放含Hsp70的细胞外囊泡，因此循环eHsp70水平在一定程度上反映了肿瘤负荷和生物学侵袭性。此外，eHsp70作为一种损伤相关分子模式（DAMP），可通过激活TLR2和TLR4受体触发免疫级联反应，参与肿瘤-宿主互作。研究人员同时指出，eHsp70并非肿瘤特异性分子，炎症、感染、组织损伤及合并疾病也可能影响其循环水平。研究还观察到，将eHsp70与TNM分期等常规临床病理指标联合应用，可能有助于改善风险分层。研究局限性包括：单中心回顾性设计、样本量较小（尤其肺转移亚组仅有23例）、队列存在生物学异质性、截断值系基于本队列ROC分析得出而可能产生偏乐观的估计，以及仅单一术前时间点测定而无法评估eHsp70的动态变化。值得注意的是，两名患者术后随访期间额外测定了eHsp70，其中一例无事件患者术后3个月水平较低，另一例进展期患者术后6个月水平显著升高（597.74 ng/mL），但该观察仅具描述性，不能用于推断预后关联。研究结论翻译如下：总而言之，在接受胸外科手术的非小细胞肺癌患者中，术前血液中较高的eHsp70水平与较短的无事件生存期相关。这些发现支持eHsp70作为一种潜在预后生物标志物候选分子的可能性。然而，eHsp70目前尚不应被视为已确立的独立临床生物标志物。未来仍需开展具有充分统计学效能的独立前瞻性研究，采用标准化的Hsp70检测方法和预先设定的截断值，并结合纵向测量，以验证这些发现，并确定eHsp70能否在胸部恶性肿瘤患者中提供超越既有临床病理因素的预后信息。
