《Journal of Obstetrics and Gynaecology》：SHC1 affects oestrogen-driven differentiation and barrier function of vaginal epithelial cells via EGFR/Ras/ERK pathway
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背景：阴道萎缩（VA）是与雌激素缺乏相关的常见疾病，严重影响女性生活质量。含Src同源2结构域的转化蛋白1（SHC1）参与多种激素依赖性过程。本项目旨在研究雌激素是否通过调控SHC1促进阴道上皮细胞的增殖、迁移和分化，并阐明其潜在机制。方法：建立去卵巢（OVX
背景：阴道萎缩（VA）是与雌激素缺乏相关的常见疾病，严重影响女性生活质量。含Src同源2结构域的转化蛋白1（SHC1）参与多种激素依赖性过程。本项目旨在研究雌激素是否通过调控SHC1促进阴道上皮细胞的增殖、迁移和分化，并阐明其潜在机制。方法：建立去卵巢（OVX）小鼠VA模型并给予17β-雌二醇（E2）处理。用人阴道上皮VK2/E6E7细胞，以剂量依赖性方式给予E2刺激，转染SHC1过表达（OE-SHC1）、SHC1敲低（sh-SHC1）或表皮生长因子受体（EGFR）过表达（OE-EGFR）质粒。对阴道组织进行组织学和免疫组织化学分析。分别通过CCK-8和划痕愈合实验评估细胞增殖和迁移。Western blot分析细胞/组织蛋白（分化/屏障标志物、Ras/ERK通路组分）。结果：E2在萎缩阴道组织和VK2/E6E7细胞中均以剂量依赖性方式上调SHC1表达。SHC1过表达增强，而SHC1敲低减弱E2诱导的细胞增殖、迁移以及分化标志物（角蛋白6a（krt6a）、角蛋白13（krt13））和屏障标志物（E-钙黏蛋白、occludin）的表达。机制上，SHC1通过作为EGFR的衔接蛋白并激活下游Ras/ERK通路来介导E2的作用。EGFR过表达可挽救E2处理的VK2/E6E7细胞中SHC1缺陷的表型。在OVX小鼠中，SHC1敲低逆转了E2介导的阴道上皮结构恢复、增殖（Ki67）和Ras/ERK信号传导。结论：SHC1通过EGFR/Ras/ERK轴是E2诱导的阴道上皮稳态的关键介质，代表了VA干预特别是通过局部递送策略的潜在下游治疗靶点。
阴道萎缩（VA）是绝经泌尿生殖综合征（GSM）的组成部分，由雌激素水平下降引起，导致阴道上皮稳态失衡，出现干涩、性交痛和感染风险增加，并与复发性尿路感染及盆底功能障碍相关。雌激素替代疗法（ERT）可恢复黏膜厚度、促进上皮增殖和屏障功能，但其分子机制尚未完全阐明。经典理论认为雌激素通过核内受体直接调节基因转录，但新近证据提示表皮生长因子（EGF）系统也参与其中，尤其是表皮生长因子受体（EGFR）在上皮细胞增殖、迁移和存活中发挥关键作用。然而，连接雌激素信号与EGFR通路激活的分子桥梁尚不清楚。SHC1是一种进化保守的衔接蛋白，可桥接受体酪氨酸激酶（RTK）与下游信号分子，调控Ras/MAPK/ERK、PI3K-AKT等通路，在激素敏感组织中可能参与非基因组雌激素信号，但其在阴道上皮中的表达是否受雌激素调控此前未见报道。据此，研究人员假设雌激素通过上调阴道上皮细胞中的SHC1表达来介导VA修复。
研究人员建立了去卵巢（OVX）小鼠VA模型，给予17β-雌二醇（E2）治疗，并在人阴道上皮VK2/E6E7细胞中通过剂量依赖性E2刺激、SHC1过表达（OE-SHC1）、SHC1敲低（sh-SHC1）和EGFR过表达（OE-EGFR）实验，系统验证了SHC1对雌激素诱导的细胞增殖、迁移、分化、屏障功能及相关信号通路的影响。研究发现，SHC1是雌激素通过EGFR/Ras/ERK轴维持阴道上皮稳态的关键介质，为VA干预尤其是局部递送策略提供了潜在的下游治疗靶点。
在技术方法上，研究人员使用OVX小鼠模型（每组8只，共5组：sham、OVX、OVX+E2、OVX+E2+sh-NC、OVX+E2+sh-SHC1），通过皮下注射E2和阴道壁局部注射慢病毒载体进行干预；体外实验采用人阴道上皮细胞系VK2/E6E7，进行E2刺激及质粒转染。主要方法包括：苏木精-伊红染色测量阴道上皮厚度及细胞层数，免疫组织化学检测SHC1和Ki67表达，Western blot检测分化标志物（krt6a、krt13）、屏障蛋白（E-cadherin、occludin）及EGFR、Ras、p-ERK/ERK水平，CCK-8实验评估细胞增殖，划痕愈合实验评估细胞迁移。数据采用SPSS 26.0进行统计分析。
研究结果分为以下几个部分。一、雌激素上调萎缩阴道组织和培养的阴道上皮细胞中SHC1表达：通过OVX小鼠模型和HE染色证实，E2可恢复阴道黏膜厚度和上皮层次；免疫组织化学显示OVX组SHC1表达下降而E2处理后升高；Western blot证实E2在VK2/E6E7细胞中以剂量依赖方式上调SHC1蛋白。二、SHC1调节E2驱动的阴道上皮细胞表型：在E2处理下，SHC1过表达增强VK2/E6E7细胞增殖和迁移，而SHC1敲低则显著抑制这些效应。三、SHC1调节阴道上皮分化标志物和屏障功能标志物的表达：SHC1过表达上调krt6a、krt13、occludin和E-cadherin蛋白水平，SHC1敲低则产生相反效应。四、SHC1作为EGFR的衔接蛋白激活Ras/ERK通路介导雌激素效应：GeneMANIA预测SHC1与EGFR存在功能关联；SHC1敲低不影响EGFR蛋白水平，但EGFR过表达可挽救SHC1敲低导致的增殖和迁移抑制；SHC1敲低降低Ras蛋白水平和p-ERK/ERK比值，EGFR过表达则恢复这些信号分子水平。五、EGFR过表达挽救SHC1缺乏导致的表皮分化和屏障完整性损伤：在SHC1敲低细胞中，EGFR过表达可恢复krt6a、krt13、occludin和E-cadherin的表达。六、SHC1敲低减弱E2介导的组织修复和信号激活：在OVX小鼠中，SHC1敲低逆转了E2诱导的阴道上皮厚度和细胞层数恢复，降低了SHC1和Ki67免疫组化信号，并抑制Ras和p-ERK/ERK表达。
讨论部分指出，SHC1是将雌激素信号与EGFR/Ras/ERK轴相连接的分子枢纽，在阴道上皮稳态中发挥不可替代的作用。既往研究表明SHC1在乳腺癌等激素敏感组织中参与非基因组雌激素信号，本研究首次在阴道上皮证实这一机制。直接ERT虽能全面恢复阴道上皮，但存在全身性风险，靶向SHC1可选择性激活非基因组EGFR/Ras/ERK通路，可能避免核内ER激活带来的副作用，尤其适合局部用药。研究也存在局限性：未区分SHC1的p46SHC、p52SHC和p66SHC异构体；仅使用HPV16 E6/E7永生化细胞系，且二维单层培养不能完全模拟天然阴道上皮的分层和功能；个体间雌激素反应差异未充分体现；长期EGFR/Ras/ERK过度激活存在潜在致癌风险，未来需严格限定局部递送和间歇给药。
研究结论可翻译为：本研究证实SHC1是E2通过EGFR/Ras/ERK轴诱导阴道上皮稳态中非基因组信号传导的关键介质。研究人员发现SHC1表达受雌激素上调，并通过与EGFR相互作用激活下游Ras/ERK通路，从而驱动上皮细胞增殖、分化和屏障功能恢复。这些发现将SHC1确定为通路选择性恢复阴道上皮完整性的关键节点，值得在局部递送模式下进一步评估。
