岩藻糖基化α1-酸性糖蛋白作为慢性病毒性肝炎无创纤维化标志物的诊断价值研究

《Scandinavian Journal of Clinical and Laboratory Investigation》：Fucosylated α-1-acid glycoprotein as a noninvasive fibrosis marker in chronic viral hepatitis

　　

摘要翻译：研究人员既往已开发出一种潜在的无创纤维化标志物，即采用凝集素免疫测定法检测血浆中岩藻糖基化α1-酸性糖蛋白（plasma fucosylated α1-acid glycoprotein，P-AGP-FR）。本研究旨在探讨P-AGP-FR在慢性病毒性肝炎患者中对肝硬化和肝纤维化的诊断准确性。研究在两个中心共纳入124例患者，其中80例为慢性乙型肝炎，44例为慢性丙型肝炎。研究人员以肝活检或瞬时弹性成像（transient elastography）作为纤维化或肝硬化的评估标准，分析P-AGP-FR水平与纤维化程度的关系，并将其诊断准确性与其他无创生化纤维化标志物APRI和FIB-4进行比较。结果显示，肝纤维化患者的AGP岩藻糖基化水平升高，P-AGP-FR值与纤维化程度在所有组别中均呈显著相关。P-AGP-FR值越高，纤维化概率越大，优势比（odds ratio，OR）为2.79。研究人员分别以肝活检和肝脏弹性成像为参照，对P-AGP-FR诊断纤维化的准确性进行受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线分析。以肝活检为参照时，ROC曲线下面积（area under the ROC curve，AUROC）为0.74（95% CI：0.58–0.91）；以肝脏弹性成像为参照时，AUROC为0.72（95% CI：0.58–0.85）。依据Youden指数确定的最佳截断值，以肝活检为参照时为1.95，敏感度为63.6%，特异度为85.7%；以肝脏弹性成像为参照时为1.44，敏感度为54.6%，特异度为78.8%。结论：以P-AGP-FR测得的AGP岩藻糖基化水平在肝纤维化和肝硬化患者中显著升高，且P-AGP-FR与纤维化分期之间存在显著相关性。

论文解读：慢性病毒性肝炎，包括慢性乙型肝炎和慢性丙型肝炎，是全球范围内导致肝纤维化和肝硬化的重要病因。肝纤维化是肝脏长期炎症导致细胞外基质过度沉积的结果，持续进展可发展为肝硬化，引起肝功能丧失甚至死亡。目前，肝活检是诊断肝纤维化和肝硬化的参考标准，但该操作存在疼痛、出血等并发症风险，死亡率约为0.01%，并发症发生率约为5.9%。因此，开发无创、可靠的纤维化标志物具有重要临床意义。现有无创方法如瞬时弹性成像（transient elastography）和血清学标志物（APRI、FIB-4等）虽广泛应用，但均存在一定局限，如弹性成像设备昂贵、易受肥胖和炎症影响，而生物化学标志物诊断早期纤维化的准确性仍有待提高。蛋白质糖基化异常在肝病中已被证实，特别是α1-酸性糖蛋白（α1-acid glycoprotein，AGP）的岩藻糖基化水平在肝纤维化和肝硬化患者中升高。研究人员既往开发了基于凝集素免疫测定的血浆AGP岩藻糖基化比率（P-AGP-FR）作为候选无创纤维化标志物，但尚未在慢性病毒性肝炎患者中进行系统验证。本研究旨在评估P-AGP-FR在慢性病毒性肝炎患者中诊断肝纤维化和肝硬化的准确性，并与其他常用生化标志物进行比较。

研究人员从瑞典两个中心（卡尔马郡医院和卡罗林斯卡大学医院胡丁厄院区）招募了124例慢性病毒性肝炎患者，其中80例为慢性乙型肝炎（含5例丁型肝炎合并感染），44例为慢性丙型肝炎。所有患者均接受肝活检或瞬时弹性成像评估纤维化分期，并采集血清样本。根据参考标准将患者分为无纤维化（F0-F1）、纤维化（F2-F3）和肝硬化（F4）三组。研究采用凝集素免疫测定法检测P-AGP-FR，同时计算APRI和FIB-4，并进行统计学分析以评估其诊断性能。

本研究采用的主要关键技术方法包括：①凝集素免疫测定法（lectin ELISA）——使用重组Aleuria Aurantia凝集素（AAL）检测患者血清或血浆中AGP的岩藻糖基化水平，计算P-AGP-FR，即以患者样本吸光度与健康男性正常混合血浆吸光度的比值表示；②肝活检（liver biopsy）——采用超声引导下经皮穿刺技术获取肝组织，使用METAVIR评分系统评估纤维化分期；③瞬时弹性成像（transient elastography，Fibroscan?）——根据肝脏硬度值划分纤维化分期，对应METAVIR分类；④生化标志物计算——APRI和FIB-4均依据公式计算；⑤统计学分析——采用Kruskal-Wallis检验、Spearman秩相关分析、线性回归模型和ROC曲线分析等评估诊断准确性。

研究结果显示：在纤维化患者中，P-AGP-FR水平显著升高。三组患者的P-AGP-FR中位数分别为：无纤维化组1.04，纤维化组1.69，肝硬化组2.98。Kruskal-Wallis检验显示三组间差异具有高度统计学显著性（χ2=25.9，p<0.001），总体效应量η2=0.20，属于大效应。事后配对比较显示，纤维化组和肝硬化组的P-AGP-FR水平均显著高于无纤维化组（p<0.001），但纤维化组与肝硬化组之间的差异未达到统计学显著（p=0.113）。线性回归分析显示，在未校正模型中，纤维化（β=1.44，95% CI：0.70–2.19，p<0.001）和肝硬化（β=3.52，95% CI：2.04–5.01，p<0.001）均与P-AGP-FR水平显著相关；经年龄和性别校正后，校正系数几乎不变（纤维化β=1.40，肝硬化β=3.51），且年龄和性别本身与P-AGP-FR无显著关联，表明该标志物独立于年龄和性别。Tukey校正后配对比较显示纤维化与肝硬化之间的差异在未校正和校正模型中均达到统计学显著（p=0.025和p=0.026）。Spearman相关分析显示，P-AGP-FR与肝活检和弹性成像诊断的纤维化分期均呈显著正相关（ρ分别为0.43和0.34），与APRI和FIB-4也呈显著相关。ROC曲线分析显示，以肝活检为参考标准时，P-AGP-FR诊断显著纤维化（≥F2）的AUROC为0.74（95% CI：0.58–0.91）；以弹性成像为参考标准时，AUROC为0.72（95% CI：0.58–0.85）。通过Youden指数确定的最佳截断值，以肝活检为参照时为1.95（敏感度63.6%，特异度85.7%），以弹性成像为参照时为1.44（敏感度54.6%，特异度78.8%）。与APRI和FIB-4相比，在后两者中APRI（AUROC 0.79和0.88）和FIB-4（AUROC 0.83和0.87）均高于P-AGP-FR（0.74和0.72）。

讨论部分指出，本研究的P-AGP-FR诊断准确度（AUROC约0.7）与常用无创纤维化标志物处于同一水平，但在本患者队列中并未显示出优于APRI和FIB-4的诊断准确性。APRI和FIB-4与弹性成像结果的相关性高于与肝活检结果的相关性，这可能是由于肝炎症引起的AST升高会影响生化纤维化评分，同时炎症也会导致弹性成像的肝脏硬度值升高，与真正的纤维化程度无关。研究还存在一些局限性：肝硬化和纤维化患者数量较少，且以慢性乙型肝炎患者为主，可能影响标志物的诊断准确性；由于伦理原因，并非所有患者均同时接受肝活检和弹性成像。未来需要在更大、分层队列中进一步验证，并考虑病因特异性截断值。结论部分总结：以P-AGP-FR测得的AGP岩藻糖基化水平在肝纤维化和肝硬化患者中显著升高，且与纤维化分期显著相关。血清糖蛋白岩藻糖基化测量可能作为肝纤维化的生物标志物具有价值，将P-AGP-FR纳入多变量模型并在更大患者队列中研究将进一步明确其临床实用性。