《Drug Testing and Analysis》：Comprehensive Evaluation of Commercial Antibodies for High Sensitivity Detection of EPO-Doping on Western Blots
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当前用于检测促红细胞生成素（EPO）及其类似物的凝胶电泳分析方法，依赖于抗EPO抗体克隆AE7A5的高分析灵敏度。因此，世界反兴奋剂机构（WADA）技术文件TD2024EPO将AE7A5指定为Western blot（蛋白质印迹）上推荐使用的主要抗体。然而，该
当前用于检测促红细胞生成素（EPO）及其类似物的凝胶电泳分析方法，依赖于抗EPO抗体克隆AE7A5的高分析灵敏度。因此，世界反兴奋剂机构（WADA）技术文件TD2024EPO将AE7A5指定为Western blot（蛋白质印迹）上推荐使用的主要抗体。然而，该技术文件也允许使用“经过充分验证、具有相似特异性和敏感性特征的其他抗人EPO抗体”。迄今为止，尚缺乏一种经充分验证、在Western blot性能上可与AE7A5相当的替代抗体。为填补这一空白，研究人员对市售抗人EPO抗体进行了大规模评估。共对164种抗体（69种多克隆抗体、95种单克隆抗体）进行了相对于AE7A5的灵敏度筛选。重组兔单克隆抗体克隆HL1794成为首选候选抗体，其在灵敏度和特异性方面均优于AE7A5。该抗体在尿液基质中得到了进一步表征。在10 mL尿样中，所有四种受试EPO受体激动剂（BRP-EPO、NESP、EPO-Fc和CERA）均可被检测，检测浓度低至TD2024EPO规定的最低要求性能水平（MRPLs）的至少0.1倍。尽管使用了二抗进行检测，非特异性结合仍保持在最低水平。此外，研究人员还评估了HL1794的两种商业偶联形式：辣根过氧化物酶（HRP）偶联相对于未偶联克隆降低了分析灵敏度，而生物素化则产生了显著升高的背景信号。上述发现极具前景，代表了电泳法ERA检测方法学的一项重要进展。进一步的实验室间验证研究可能有助于加强HL1794在未来常规反兴奋剂应用中的实施。
促红细胞生成素受体激动剂（EPO receptor agonists，ERAs）是《WADA 2026年禁用清单》中明确禁止的物质。现有检测重组EPO及其类似物的电泳方法均依赖单克隆抗体AE7A5作为一抗，因其灵敏度最高，WADA技术文件TD2024EPO将其指定为Western blot主要推荐抗体。然而，AE7A5存在脱靶结合问题，会与尿液和血液中多种内源性蛋白发生非特异性反应，且该现象与该抗体免疫原肽段中的两个氨基酸错误有关。因此，常规兴奋剂检查样品必须经免疫亲和纯化（immunoaffinity purification）才能进行电泳分析，并且需要使用另一种EPO抗体作为捕获/富集抗体。由于缺乏经过验证的替代抗体，实验室为满足TD2024EPO对初始检测程序（initial testing procedure，ITP）和确认程序（confirmation procedure，CP）分离的要求，通常需建立两套独立免疫亲和纯化流程。市售抗人EPO抗体超过150种，但大多未与AE7A5进行系统比较。为寻找合适的替代抗体并增强ITP和CP操作灵活性，研究人员对164种商业抗体（69种多克隆、95种单克隆）进行了大规模筛选，并以AE7A5为基准评估其分析灵敏度。
研究采用SAR-PAGE（sarcosyl聚丙烯酰胺凝胶电泳）结合半干式Western blot和化学发光检测。筛选体系中，含rEPO、NESP、
