肥胖调节结节病患者淋巴结CD4+T细胞LAG-3与CTLA-4表达：基于EBUS-TBNA的免疫表型研究

《Immunobiology》：Impact of obesity on LAG-3 and CTLA-4 expression in CD4+ T cells from lymph nodes of sarcoidosis patients

　　

肥胖日益被认为是影响结节病（sarcoidosis, SA）免疫调节的代谢因素。本研究探讨了肥胖是否改变新诊断、未经治疗SA患者淋巴结驻留T细胞上的免疫检查点表达。63名受试者接受了经支气管超声引导下经支气管针吸活检（Endobronchial Ultrasound-Guided Transbronchial Needle Aspiration, EBUS-TBNA），并对淋巴结（lymph node, LN）抽吸物和外周血（peripheral blood, PB）进行流式细胞术分析，分为肥胖组（n=18）和非肥胖组（n=45）。肥胖与独特的淋巴结特异性免疫表型改变相关，包括CD4⁺ T细胞上LAG-3（lymphocyte-activation gene 3）和CTLA-4（cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4）表达显著升高，以及CD8⁺ T细胞上TIM-3（T-cell immunoglobulin and mucin domain-containing protein 3）表达降低。肥胖患者还表现出高荧光细胞计数减少和淋巴细胞荧光强度降低，提示激活状态改变。这些差异在外周血中不存在，强调了组织特异性免疫调节。肥胖患者肺功能较低，但主要作为临床相关指标。总体而言，肥胖是SA中局部T细胞调节的相关修饰因素，凸显了基于淋巴结的免疫表型分析的价值。

结节病（sarcoidosis, SA）是一种病因不明的多系统疾病，主要累及肺门淋巴结、肺、眼和皮肤。肥胖作为一种可改变的生活方式因素，可能通过促进促炎状态参与SA的发生和发展。然而，肥胖是否影响SA患者淋巴结内T细胞的免疫检查点表达，此前尚不清楚。本研究旨在探讨肥胖对新诊断、未治疗SA患者淋巴结和外周血中T细胞免疫检查点表达及肺功能的影响。

研究人员纳入63例新诊断SA患者，根据体重指数（body mass index, BMI）≥30 kg/m²将患者分为肥胖组（n=18）和非肥胖组（n=45），通过EBUS-TBNA获取淋巴结抽吸物和外周血，采用流式细胞术分析淋巴细胞亚群及CD28、LAG-3、TIM-3、PD-1（programmed death-1）、CTLA-4等免疫检查点分子的表达，并评估其与弥散功能（diffusing capacity for carbon monoxide, DLCO）和影像学分期的关联。研究结果显示，肥胖患者淋巴结CD4⁺ T细胞上LAG-3和CTLA-4表达显著升高，CD8⁺ T细胞上TIM-3表达降低，且这些差异仅存在于淋巴结而非外周血，提示肥胖在SA中发挥组织特异性的免疫调节作用。该研究首次将肥胖与SA免疫检查点表达改变相关联，并验证了EBUS-TBNA材料在转化免疫学研究中的价值。

研究方法方面，样本来源于2023年1月至2025年8月入组的63例新诊断SA患者，均经EBUS-TBNA获取淋巴结标本，并采集外周血。主要技术方法包括：Sysmex XN-1500血液分析仪进行血液学参数分析；多参数流式细胞术（采用DxFLEX流式细胞仪）检测淋巴细胞亚群和免疫检查点表达；使用Statistica 13.0和GraphPad Prism 8进行统计学分析，组间比较采用非配对t检验或Mann-Whitney U检验，并构建多变量线性回归模型进行敏感性分析。

研究结果部分，4.1患者特征显示，肥胖组与非肥胖组年龄相似，男性均占多数，SA分期均以I期和II期为主。肥胖组DLCO平均值显著低于非肥胖组（78.9%±2.8% vs 86.3%±8.3%，p=0.02910），FEV₁/FVC也较低（80.0%±6.9% vs 86.2%±7.8%，p=0.03056）。4.2肥胖与非肥胖患者淋巴细胞免疫表型比较显示，肥胖患者CD4⁺ T细胞上LAG-3（中位29.6% vs 6.4%，p=0.000100）和CTLA-4（中位55.2% vs 34.2%，p=0.024134）表达显著升高，CD8⁺ T细胞上TIM-3表达降低（中位11.4% vs 36.5%，p=0.009032）；此外，肥胖组高荧光细胞（high fluorescence cells, HF）比例和绝对计数降低，淋巴细胞荧光强度（LY-Y）也降低。多变量回归分析支持肥胖独立预测LAG-3和CTLA-4表达。外周血中未见显著组间差异。4.3 I期和II期SA分期比较显示，II期患者淋巴细胞占白细胞比例（中位90.4% vs 83.4%，p=0.042600）和CD4⁺ T细胞占淋巴细胞比例（中位42.0% vs 34.2%，p=0.030621）高于I期，而CD4⁺ T细胞上TIM-3表达低于I期（中位22.5% vs 53.6%，p=0.047320）。4.4根据DLCO值分组比较显示，DLCO<80%的患者CD8⁺ T细胞占淋巴细胞比例低于DLCO>80%组（中位9.6% vs 14.0%，p=0.002390），而CD4/CD8比值更高（中位4.8 vs 2.9，p=0.002000）。所有免疫表型差异均见于淋巴结，外周血无显著变化。

讨论部分指出，EBUS-TBNA来源的材料适用于流式细胞术分析，可用于淋巴结微环境的免疫表型评估。肥胖组肺功能下降与文献一致，主要作为临床相关指标。肥胖相关的免疫检查点失调仅在淋巴结中可检出，提示肥胖塑造局部肉芽肿性T细胞调节，而外周血无法反映。肥胖患者CD4⁺ T细胞上LAG-3和CTLA-4高表达可能与肥胖相关慢性炎症增强抑制性信号有关，但缺乏功能学试验，不能直接判定为T细胞耗竭。CD8⁺ T细胞上TIM-3低表达与肥胖相关免疫失调中细胞毒性T细胞抑制性受体下调的现象一致。此外，DLCO降低与CD4/CD8比值升高相关，提示T细胞失衡与功能损伤有关。研究局限性包括样本量较小、未检测代谢相关炎症因子等，结果属于探索性和假设生成性质。

研究结论部分翻译如下：总之，肥胖似乎是SA中免疫调节的生物学相关修饰因素。肥胖患者CD4⁺ T细胞上LAG-3和CTLA-4表达升高提示代谢性炎症可能增强肉芽肿性淋巴结内的抑制性信号。本研究首次提供了肥胖与SA免疫检查点表达改变相关联的证据，并展示了EBUS-TBNA材料在转化免疫学中的价值。这些发现强调了肥胖作为肉芽肿性疾病局部免疫反应潜在调节因素的作用。