《Foods》：The Citrus Flavonoid Naringin Confers Neuroprotection Against Cerebral Ischemia by Enhancing Endogenous Antioxidant Capacity and Suppressing Neuroinflammation
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柚皮苷是一种天然存在于柑橘类水果中的黄烷酮糖苷，因其抗氧化和抗炎活性而被广泛研究。柚皮苷对缺血性脑卒中发挥保护作用的具体机制尚未完全阐明。为弥补这一研究空白，本研究在永久性右侧大脑中动脉闭塞（Rt.MCAO）实验大鼠模型中评估了柚皮苷给药（100 mg/kg
柚皮苷是一种天然存在于柑橘类水果中的黄烷酮糖苷，因其抗氧化和抗炎活性而被广泛研究。柚皮苷对缺血性脑卒中发挥保护作用的具体机制尚未完全阐明。为弥补这一研究空白，本研究在永久性右侧大脑中动脉闭塞（Rt.MCAO）实验大鼠模型中评估了柚皮苷给药（100 mg/kg BW）的疗效。结果表明，柚皮苷给药显著改善了缺血损伤后的神经功能表现，同时减小了脑梗死体积和脑水肿。组织病理学评估进一步证明，柚皮苷保留了大脑皮层和海马区的神经元密度，表明其对缺血诱导的神经元变性具有保护作用。同时，柚皮苷减弱了胶质细胞活化，表现为离子化钙结合适配器分子1（Iba1）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达降低，并伴随促炎介质白细胞介素-6（IL-6）和环氧合酶-2（COX-2）的抑制。此外，柚皮苷通过降低丙二醛（MDA）水平并维持内源性抗氧化酶过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）和线粒体超氧化物歧化酶（mitochondrial SOD）的活性，恢复了氧化还原稳态。髓过氧化物酶（MPO）活性的显著降低进一步支持其缓解氧化应激和炎症反应的能力。研究人员的发现表明，柚皮苷在实验性缺血性脑卒中中具有神经保护作用，这些效应与其增强抗氧化防御和减轻神经炎症反应相关。然而，仍需进一步的临床前研究以确认其潜在机制、最佳治疗条件及长期效应。
脑卒中（stroke）是导致全球死亡和长期残疾的主要原因之一，给公共卫生系统带来沉重负担。在分子层面，缺血性脑卒中触发氧化应激与炎症相互促进的破坏性循环，导致神经元进行性损伤。脑组织富含脂质且内源抗氧化能力相对较低，因此对氧化损伤尤为敏感。缺血时，线粒体功能紊乱导致活性氧（ROS）大量释放，耗竭超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）等内源性抗氧化酶，继而引发细胞膜、蛋白质和DNA的广泛损伤。同时，核因子κB（NF-κB）信号通路激活，促进白细胞介素-6（IL-6）和环氧合酶-2（COX-2）等炎症介质表达，小胶质细胞活化（以离子化钙结合适配器分子1（Iba1）上调为标志）和星形胶质细胞反应性增生（以胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达增加为特征）进一步放大组织损伤。针对这一复杂网络，天然来源的黄酮类化合物受到广泛关注。柚皮苷（naringin）是柑橘类水果中含量丰富的黄烷酮糖苷，具有抗氧化和抗炎活性。既往研究多集中于缺血再灌注模型，柚皮苷在永久性脑缺血中的作用尚不明确。本研究旨在探讨柚皮苷对永久性右侧大脑中动脉闭塞（Rt.MCAO）大鼠模型的神经保护效应，并评估其对神经功能、脑水肿、梗死体积、神经炎症及内源性抗氧化防御的影响。
研究人员采用雄性Wistar大鼠（8周龄，体重250–300 g，来源于泰国孔敬大学东北实验动物中心），建立永久性Rt.MCAO模型，将60只大鼠随机分为4组（每组15只）：假手术组、Rt.MCAO+溶剂（1% DMSO）组、Rt.MCAO+吡拉西坦（250 mg/kg BW，阳性对照）组、Rt.MCAO+柚皮苷（100 mg/kg BW）组。药物于造模后立即经腹腔注射给予，每日一次，连续7天。各组15只大鼠再分为3个独立子集（每组n=5），分别用于分子生化分析、免疫组化评估及神经功能/梗死体积/脑含水量检测。主要技术方法包括：20分改良神经严重程度评分（mNSS）评估神经功能；湿干重法测定脑含水量；2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色测定脑梗死体积；甲酚紫染色评估神经元密度；免疫组化检测Iba1和GFAP表达；Western blot检测IL-6和COX-2蛋白表达；生化法检测髓过氧化物酶（MPO）活性、丙二醛（MDA）含量以及CAT、GSH-Px、SOD和线粒体SOD活性。
3.1 柚皮苷减轻Rt.MCAO后的神经功能缺损
mNSS评分显示，Rt.MCAO+溶剂组大鼠在缺血后第1天和第7天神经功能缺损评分显著高于假手术组（p < 0.05）。柚皮苷治疗在两个时间点均显著降低了神经功能缺损评分（p < 0.05），且第7天评分较第1天显著下降（p < 0.05），表明神经功能随时间持续改善。
3.2 柚皮苷减轻Rt.MCAO后的脑水肿
脑含水量测定显示，Rt.MCAO+溶剂组大鼠脑水肿显著加重（p < 0.05），而柚皮苷和吡拉西坦治疗均显著减轻了缺血诱导的脑肿胀（p < 0.05），表明柚皮苷对缺血性脑水肿具有保护作用。
3.3 柚皮苷减小缺血性脑卒中后的脑梗死体积
TTC染色结果显示，Rt.MCAO+溶剂组大鼠出现明显的脑梗死区域，而柚皮苷和吡拉西坦治疗组梗死体积均显著减小（p < 0.05），假手术组未观察到梗死区域，表明柚皮苷能有效限制缺血损伤范围。
3.4 柚皮苷减轻大脑皮层和海马区的神经元丢失
甲酚紫染色定量分析表明，Rt.MCAO导致大脑皮层及海马CA1和CA3亚区神经元密度显著降低，柚皮苷和吡拉西坦治疗均显著保留了这些区域的神经元密度（p < 0.05），表明柚皮苷的神经保护作用部分归因于对缺血后神经元变性的抑制。
3.5 柚皮苷抑制脑卒中诱导的皮层和海马小胶质细胞活化
Iba1免疫组化染色显示，缺血性脑卒中显著增加了皮层和海马CA3区Iba1阳性细胞数量及免疫反应面积（p < 0.001）。柚皮苷和吡拉西坦治疗均显著降低了Iba1阳性细胞数量（皮层p < 0.01，海马p < 0.05）及免疫反应面积（p < 0.001），表明柚皮苷可有效抑制缺血诱导的小胶质细胞活化。
3.6 柚皮苷减弱脑卒中诱导的皮层和海马星形胶质细胞活化
GFAP免疫组化检测显示，Rt.MCAO显著增加了皮层（p < 0.001）和海马CA3区（p < 0.05）的GFAP阳性星形胶质细胞数量及免疫反应面积（p < 0.001）。柚皮苷和吡拉西坦治疗显著降低了皮层GFAP阳性细胞数量（p < 0.05）及皮层（p < 0.001）和海马CA3区（p < 0.05）的GFAP免疫反应面积，表明柚皮苷可抑制反应性星形胶质增生。
3.7 柚皮苷降低缺血脑组织中的髓过氧化物酶（MPO）活性
MPO活性测定显示，Rt.MCAO+溶剂组大鼠皮层和海马组织中MPO活性显著升高（p < 0.05），柚皮苷和吡拉西坦治疗均显著降低了MPO活性（p < 0.05），表明柚皮苷可减少中性粒细胞浸润和炎症激活。
3.8 柚皮苷调节皮层和海马MDA水平及抗氧化酶活性
生化检测结果显示，Rt.MCAO显著升高了皮层和海马MDA水平，并显著降低了CAT、GSH-Px和SOD活性（p < 0.05）。柚皮苷和吡拉西坦治疗均显著降低了MDA积累（p < 0.05），同时保留了CAT、GSH-Px和SOD的活性（p < 0.05），表明柚皮苷可有效恢复缺血后的氧化还原平衡。
3.9 柚皮苷增强皮层和海马线粒体超氧化物歧化酶（SOD）活性
线粒体SOD活性检测显示，Rt.MCAO大鼠皮层和海马线粒体SOD活性显著低于假手术组（p < 0.05）。柚皮苷和吡拉西坦治疗均显著减轻了线粒体SOD活性的下降（p < 0.05），表明柚皮苷有助于保护线粒体抗氧化功能。
3.10 柚皮苷减轻Rt.MCAO大鼠的神经炎症反应
Western blot分析显示，Rt.MCAO+溶剂组大鼠皮层和海马组织中COX-2和IL-6蛋白表达显著升高。连续7天给予柚皮苷或吡拉西坦均显著降低了COX-2和IL-6在皮层和海马中的表达（p < 0.05），表明柚皮苷的神经保护作用与抑制炎症信号通路密切相关。
讨论部分指出，脑缺血后神经炎症与氧化应激相互促进，形成恶性循环，加剧神经元损伤。本研究中柚皮苷治疗显著抑制了小胶质细胞和星形胶质细胞活化，降低IL-6和COX-2表达，同时减少MPO活性和MDA水平，并维持CAT、GSH-Px、SOD及线粒体SOD活性，表明柚皮苷通过协同调节氧化还原稳态和炎症反应发挥多靶点神经保护作用。既往研究支持柚皮苷通过调节PI3K/Akt、NF-κB和Nrf2等信号通路发挥保护作用，本研究进一步在永久性脑缺血模型中验证了其抗炎和抗氧化效应。研究局限性包括：采用腹腔注射而非口服途径，限制了向膳食补充的直接转化；未检测柚皮苷及其代谢物的血浆和脑组织浓度；仅评估单一剂量（100 mg/kg BW）和急性期效应；研究对象仅包含雄性大鼠；未进行长期功能评估。未来需采用口服给药和药代动力学分析，考察多剂量和不同治疗时间窗，纳入雌性动物并开展长期行为学评估，以全面评价柚皮苷的临床转化潜力。
结论：综上所述，柚皮苷治疗与大鼠永久性脑缺血后神经功能改善、梗死面积和脑水肿减小以及神经元完整性维持相关。这些效应与增强的抗氧化防御以及减轻的氧化和神经炎症反应相伴随。然而，仍需要进一步的临床前研究来确认潜在机制、最佳治疗条件和长期效应。后续的临床研究对于确定这些发现能否转化为潜在的治疗应用也是必要的。
