《International Journal of Agronomy》：Optimizing Propagation Success of Burmese Grape (Baccaurea ramiflora Lour) Through Strategic Grafting Approaches
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嫁接繁殖（grafting propagation）是保存树木植物真型基因型（true-to-type genotypes）的有效策略，尤其对缅甸葡萄这一雌雄异株（dioecious）木本果树而言，其通过种子繁殖时雌株发育的不确定性限制了可靠果园的建立。因此，
嫁接繁殖（grafting propagation）是保存树木植物真型基因型（true-to-type genotypes）的有效策略，尤其对缅甸葡萄这一雌雄异株（dioecious）木本果树而言，其通过种子繁殖时雌株发育的不确定性限制了可靠果园的建立。因此，本研究确定了适于缅甸葡萄快速且成功繁殖的嫁接实践。采用三重复的析因随机完全区组设计（factorial randomized complete block design，RCBD），在全年12个月中使用6个月龄接穗（scion）和12至18个月龄砧木（rootstock）进行三种嫁接方法，即劈接（cleft grafting）、侧接（side grafting）和腹接（veneer grafting）。7月嫁接的芽萌发最早（11.02 d），其次为3月、6月和8月。值得注意的是，7月嫁接获得最高嫁接成功率（93.60%）和存活率（86.42%），其次为3月操作。嫁接后90 d时，3月嫁接获得最高嫁接株高（28.67 cm）、优良接穗长度（17.27 cm）和直径（0.80 cm），其次为7月嫁接。同时，7月嫁接每株苗木产生最多新梢数（4.17）和叶片数（17.46）。就方法而言，劈接始终优于其他方法，表现为芽萌发早以及总体嫁接成功率、存活率和生长更好。此外，苗木生长、嫁接成功率和存活率性状之间存在显著正相关，且它们与芽萌发时间呈负相关，表明芽萌发越快与嫁接生长和存活改善相关。聚类分析进一步证实，3月、6月、7月和8月的劈接以及3月和7月的腹接具有优良繁殖成功。因此，推荐缅甸葡萄在3月或7月采用劈接以获得最佳效果。
缅甸葡萄（Baccaurea ramiflora Lour）是雌雄异株（dioecious，雌花与雄花着生于不同植株）木本果树，分布于东南亚多个地区，包括缅甸、尼泊尔、孟加拉国、印度、斯里兰卡、泰国及部分中南半岛地区。其果实富含铁（5.34 mg/100 g）和钾，并具抗病毒和抗氧化特性。在孟加拉国，缅甸葡萄主要在Narsingdi、Manikganj、Gazipur、Netrokona、Mymensingh和Sylhet等地区商业化栽培，但商业果园扩展受优质苗木供应不足限制。种子繁殖存在明显问题：由于高度杂合，实生苗性别不确定，常出现无果雄株或雌株不符合母本类型；同时童期较长，种植者需等待较久才能判断性别。组织培养虽可用于繁殖，但技术复杂且成本较高；相比之下，田间无性繁殖更适用于果树扩繁。嫁接（grafting）在无性繁殖中较为方便，能维持较高成功率、促进后续旺盛生长，并传递母本遗传性状。已有研究表明，嫁接成功率、存活率和生长受品种、嫁接方法、嫁接时间、操作人员技能、砧木与接穗年龄、环境条件及生长调节剂等影响；接穗成熟度、温度、湿度以及愈伤组织形成和愈合过程均影响嫁接成败。尽管缅甸葡萄可通过种子繁殖为主，但此前仅有少量关于扦插或嫁接的研究，且已有嫁接研究仅报道单一劈接（cleft grafting）方法，时间限于4月至8月，5月嫁接表现最佳。由于缅甸葡萄为春季开花（2—3月）热带水果，且另一春季开花果树avocado（Persea americana Mill.）在2月第3周嫁接表现优越，因此有必要在全年扩展时间中测试多种嫁接技术，以确认最佳嫁接策略，为孟加拉国及相似气候地区缅甸葡萄栽培扩展提供依据。
关键技术方法方面，研究人员于2020年1月至12月在孟加拉国农业研究所（Bangladesh Agricultural Research Institute）Horticulture Research Centre, Fruit Research Farm, Joydebpur, Gazipur的lath house环境条件下开展试验。样本来源为BARI Lotkan-1作接穗（scion），当地缅甸葡萄栽培种作砧木（rootstock）；2019年从当地母株采集种子育苗。接穗取自4—5年生母株，使用6个月龄接穗；砧木为12—18个月龄、铅笔粗细。试验采用析因随机完全区组设计（factorial randomized complete block design，RCBD），3次重复，因素一为12个嫁接月份，因素二为劈接、侧接和腹接三种方法，每处理重复30株。嫁接后观测至90 DAG（days after grafting，嫁接后天数）。统计分析包括Shapiro–Wilk正态性检验、arcsine、reciprocal和Box–Cox变换、双向ANOVA、Tukey’s HSD检验（p < 0.05）、相关分析和聚类分析，使用R Studio（Version 4.2.0）和Microsoft Office Excel（Version 365）。
研究结果中，主效应显示嫁接时间和嫁接方法对芽萌发天数、嫁接成功率（SCS）、存活率（SRV）、嫁接株高（GFT）、每株新梢数（SHT）、接穗长度（SLN）、接穗直径（SDM）和每株叶片数（LFN）均有显著影响；除芽萌发天数和SDM外，嫁接时间与方法存在显著交互作用。
3.1 芽萌发天数（Days to Bud Break）方面，12月嫁接芽萌发所需天数最多（17.87 d），与1月（17.54 d）相近，其次为11月（16.99 d）；7月嫁接芽萌发最早（11.02 d），其次为3月（11.93 d）。方法上，劈接芽萌发最早（13.79 d），其次为侧接（14.50 d），腹接最晚（15.47 d）。原文认为，这与接穗内贮藏物质移动有关；11月至1月较低温度（15—20°C）可能延迟芽萌发，而7月和3月嫁接后较高温度（27—30°C）和较高湿度（80%—85%）有利于早期萌发。Beshir et al.在芒果中报道劈接芽萌发天数较少，Sarker and Gomasta在avocado中认为劈接形成层表面积较大，有利于水分和养分从砧木向接穗运输，从而缩短萌发时间。
3.2 成功率与存活率（Success and Survivability）方面，7月嫁接成功率最高（93.60%），存活率也最高（86.42%）；8月成功率较高（91.62%），3月存活率较高（84.89%）。相反，12月嫁接成功率最低（62.01%），存活率最低（57.46%）；其后为1月和11月，成功率分别为68.36%和69.48%，存活率分别为63.32%和64.25%。方法上，劈接成功率最高（85.93%），存活率最高（78.92%）；腹接成功率最低（81.82%），存活率最低（75.42%）。交互作用表明，7月劈接成功率最高（97.25%），其次为2月至8月劈接以及2月、4月、5月、6月和7月侧接；12月腹接成功率最低（60.68%），与12月劈接（63.67%）和侧接（61.67%）相近。存活率交互中，6月劈接最高（89.89%），其次为2月至8月劈接以及2月至5月侧接；12月腹接存活率最低（56.08%），与12月侧接（57.22%）相似。原文指出，6月至8月日均温约30°C、最低温高于24°C、平均相对湿度高于80%，是热带和亚热带果树嫁接的理想条件。Beshir et al.在埃塞俄比亚报道6月劈接在31°C、湿度42.70%下芒果嫁接成功率最高；Sarker and Gomasta在avocado中发现3月劈接成功率和可移栽嫁接苗表现较好。劈接成功率较高可能与砧木和接穗中树液流动快、促进愈合以及形成层和维管组织连续性建立有关；Mir and Kumar也报道walnut在2月劈接成功率最高（66.66%）。
3.3 嫁接苗特性（Graft Characteristics）方面，分为若干指标。3.3.1 GFT方面，90 DAG时3月嫁接最高（28.67 cm），与6月（28.59 cm）和7月（27.97 cm）相近；12月最低（22.08 cm）。交互作用中，3月劈接最高（30.87 cm），与6月劈接（30.48 cm）和7月劈接（29.50 cm）相近；12月侧接最低（21.50 cm）。方法主效中，劈接最高（26.68 cm），腹接次之（26.11 cm），侧接最低（24.97 cm）。原文认为，3月劈接株高最大可能与砧木和接穗适当交缠与互锁、形成良好愈合和快速愈合有关；GFT受叶片数、叶面积等生长参数影响。Sarker and Gomasta在avocado中记录春季（2—3月）嫁接苗最高；Patil et al.在sapota（Manilkara zapota）中记录7月嫁接最高，存在差异；Ghojage et al.在jamun（Syzygium cumini）和Kudmulwar et al.在custard apple（Annona squamosa）中认为12月较短可能与较低温度导致芽休眠、水分和养分运输减少有关。
3.3.2 新梢与叶片数（Shoot and Leaf Number）方面，90 DAG时7月嫁接每株新梢数最多（4.17），叶片数最多（17.46）；3月（4.10）、6月（4.01）和4月（3.97）新梢数较高，且其叶片数（17.25、17.02、16.94）与7月相近。12月新梢数和叶片数最低（1.96和12.11），其后为11月和1月。方法上，劈接新梢数和叶片数最高（3.33和15.84），优于其他方法。交互作用中，7月劈接新梢数最多（4.39），叶片数最多（17.67）；2月和3月劈接叶片数也为17.67；12月侧接新梢数最低（1.88），11月腹接叶片数最低（11.37）。原文指出，新梢和叶片数差异可能由最适温度和相对湿度决定，这些因素避免芽干燥并影响嫁接植株树液流动。Patel et al.在Khasi mandarin（Citrus reticulata）软枝嫁接中报道7月新梢数最多；Bhandari和Gomasta et al.也认为天气状况影响新梢和叶片再生。劈接新梢和叶片较多可能与砧木和接穗薄壁细胞密切且精确排列，促进早期维管愈合和两部分连通有关；Sharma et al.在walnut中有类似观察。
3.3.3 接穗长度与直径（SLN and SDM）方面，90 DAG时3月嫁接接穗长度最大（17.14 cm），接穗直径最大（0.80 cm），与6月、7月和8月相近；12月接穗长度最低（14.54 cm），接穗直径最低（0.60 cm）。方法上，劈接产生最健康接穗，侧接接穗生长最小。交互作用也显示SLN和SDM存在差异。原文认为，3月嫁接接穗活力较高可能因最适温度和相对湿度，促进早期萌发、避免芽干燥并影响树液流动，有利于水分和养分从砧木向接穗转移；12月接穗较短可能与较低温度诱导芽休眠、阻碍愈伤组织形成、形成层流动、结合以及后续激素和生化运输有关。Sarker and Gomasta在avocado中观察春季劈接后接穗生长较好；但Islam et al.报道早期8月嫁接接穗长度最大，原文认为差异可能来自地点和年份。
3.4 相关性与聚类分析（Correlation and Cluster Analyses）方面，Pearson相关分析表明，芽萌发天数（BDK）与除SLN外的所有研究变量呈显著强负相关（?0.79 ≤ r ≤ ?0.86），与SLN呈中等负相关（r = ?0.53）。这意味着嫁接后芽萌发时间越长，嫁接成功率、存活率和后续生长性状越差，反之亦然。SCS、SRV、GFT、SHT、SDM和LFN彼此之间呈强至极强正相关（0.70 ≤ r ≤ 0.98），说明较高的嫁接成功率和存活率强烈影响苗木生长属性。SLN与其他参数呈中等相关（0.44 ≤ r ≤ 0.60），表明其对缅甸葡萄总体繁殖成功的影响或受其影响相对有限。聚类分析将36种嫁接实践（方法与时序组合）分为三组。Group I包括1月、10月、11月和12月所有三种嫁接方法，其嫁接成功和生长较差。Cluster II包括M3G1、M3G3、M6G1、M7G1、M7G3和M8G1，即3月劈接和腹接、6月劈接、7月劈接和腹接、8月劈接，表现优良。其余18个方法—月份组合表现中等。Dewangan et al.认为除繁殖方法外，季节性因素尤其是温度、湿度和降雨决定果树无性繁殖成功；Sarker and Gomasta在avocado、Islam et al.在pummelo、Dewangan et al.在cashew和Sharma et al.在walnut中也观察到类似时间与技术交互作用。
讨论部分总体表明，嫁接时间和方法通过温度、湿度、树液流动、愈伤组织形成、形成层与维管组织连通、芽休眠和物质运输等因素共同影响缅甸葡萄繁殖成功、存活和苗木生长。劈接由于砧木与接穗形成层接触和排列更佳，通常表现最优；7月和3月因温湿度较适宜，嫁接成功率、存活率和生长表现突出。相关分析支持芽萌发越快、嫁接成功和存活越高、苗木生长越好；聚类分析进一步确认3月、6月、7月和8月劈接以及3月和7月腹接为优良组合。
结论部分翻译如下：基于研究结果，嫁接时间和嫁接技术显著影响缅甸葡萄的繁殖成功率、存活率及后续苗木生长。在测试的操作时期中，3月和7月嫁接表现优越，而劈接被证明是实现早期芽萌发、较高嫁接成功率、更好存活率和旺盛苗木生长的最有效技术。然而，在现有农业气候条件下，6月和8月的繁殖操作以及腹接方法也可被认为适合无性繁殖。尽管本研究标准化了用于增强缅甸葡萄无性繁殖的嫁接实践，未来研究应关注其他繁殖策略、砧木性状、环境条件、多年试验和多样农业生态系统，以优化不同气候条件下的大规模繁殖。
