《Frontiers in Cell and Developmental Biology》：Stromal or exosome derived lncRNAs regulate stemness in hepatocellular carcinoma
背景：肝细胞癌（HCC）仍是全球最常见的恶性肿瘤之一，其高复发率和化疗耐药构成主要临床挑战。癌症干细胞（CSCs）被认为是HCC发生、转移和复发的重要贡献者。在肿瘤微环境（TME）中，癌症相关成纤维细胞（CAFs）可通过细胞间通讯维持CSC特性。外泌体通过将长链非编码RNA（lncRNAs）从多种TME细胞（包括CAFs、间充质干细胞（MSCs）、巨噬细胞和HCC细胞本身）递送至受体HCC细胞，作为该过程的重要介质。方法：研究人员检索PubMed和Web of Science Core Collection（建库至2026年3月），使用关键词包括“HCC”、“CAFs”、“MSCs”、“巨噬细胞”、“外泌体”、“LncRNA”和“Neoplastic Stem Cells”等。根据主题相关性和方法学严谨性选择研究；排除数据不完整或无法获取的研究。对检索文献进行综合，以阐明lncRNAs调控下游信号通路的机制，并评估其作为诊断生物标志物和治疗靶点的转化潜力。结果：本综述识别了基质或外泌体来源lncRNAs调控HCC细胞干性的多种机制，包括YAP液–液相分离（LLPS）、通过招募SWI/SNF、INO80、NuRD和BRM/BRG1复合物进行染色质重塑、通过蛋白稳定化和竞争性内源RNA（ceRNA）网络调控Wnt/β-catenin通路、通过直接转录抑制和转录因子招募调控STAT3通路，以及BMP信号通路参与。功能分类显示，这些lncRNAs通过互补的转录、转录后和蛋白水平调控机制汇聚于核心干性通路，同时整合来自TME的信号。结论：基质或外泌体来源lncRNAs构成HCC干性维持中的关键调控层，并通过液体活检（liquid biopsy）作为无创诊断生物标志物具有重要前景。靶向基质细胞–lncRNA–CSC轴的反义寡核苷酸（ASO）治疗策略是有希望的方向。然而，系统表征基质或外泌体来源lncRNA种类、阐明lncRNA分选和摄取机制，以及生物标志物和治疗应用的临床验证，仍是未来研究的重要挑战。
1 Introduction（引言）：HCC为全球第六常见恶性肿瘤和第四位癌症相关死亡原因，晚期诊断患者5年生存率低于20%。癌症干细胞（CSCs）又称肿瘤起始细胞（TICs），具自我更新和多向分化能力，是HCC发生、转移和复发的根源之一。TME由肿瘤细胞、免疫细胞、间充质细胞及基质成分构成，CAFs、外泌体和lncRNAs在其中参与细胞间通讯。现有干性重编程研究较碎片化，本综述尝试综合HCC细胞干性重编程机制并寻找潜在药物靶点。
2 Exosomal lncRNAs play critical roles in regulating HCC stemness（外泌体lncRNAs在调控HCC干性中的关键作用）
2.1 Classification and functional diversity of lncRNAs in HCC（HCC中lncRNAs的分类与功能多样性）：lncRNAs来源多样，包括长链基因间非编码RNA、内含子lncRNAs、反义转录本和假基因衍生RNA。HCC中异常表达lncRNAs参与肿瘤发生、进展和干性维持，功能异质，机制涉及染色质重塑、转录因子互作、ceRNA和蛋白稳定性/亚细胞定位调控。部分lncRNAs促干性，如lncBRM、HAND2-AS1、lncTCF7；部分抑制干性，如lnc-DILC、RUNX1-IT1。外泌体来源验证需按MISEV 2018建议综合进行颗粒、标志物、形态和货物关联分析。
2.2 Exosomes as vectors for lncRNA transmission in the tumor microenvironment（外泌体作为TME中lncRNA传递载体）：外泌体源于多囊泡体，与质膜融合后释放，其货物选择性包装并部分反映供体细胞特征。外泌体包裹可保护lncRNAs免受RNase降解，稳定递送至受体细胞并调控基因表达和细胞表型。HCC中外泌体lncRNA池由肿瘤细胞、免疫细胞和基质细胞共同贡献；MSCs和巨噬细胞可传递lncRNAs促进上皮–间充质转化（EMT）、侵袭和干性维持；CAF来源外泌体lncRNAs对HCC干性的调控近年才被阐明。
3 Acquisition and maintenance of stemness in HCC-CSCs（HCC-CSCs干性的获得与维持）：肿瘤细胞干性包括自我更新、致瘤能力、细胞可塑性和异质性后代生成。其维持主要归因于信号通路异常激活、TME重塑、病毒感染诱导改变、表观遗传修饰和代谢适应。外泌体lncRNAs参与Wnt/β-catenin、Hedgehog、JAK-STAT等通路，以及染色质重塑、DNA甲基化和组蛋白修饰等表观调控。
4 Molecular mechanisms of lncRNA-mediated regulation of stemness（lncRNA介导干性调控的分子机制）
4.1 Exosomal lncRNAs in HCC stemness regulation（外泌体lncRNAs在HCC干性调控中的作用）
4.1.1 CAF-derived exosomal NEAT1 promotes stemness via YAP liquid–liquid phase separation（CAF来源外泌体NEAT1通过YAP液–液相分离促进干性）：CAF来源外泌体NEAT1可驱动CSC成熟和HCC起始。NEAT1
v1为短亚型，NEAT1
v2为长亚型；HCC组织中NEAT1高表达与不良临床结局相关，循环外泌体NEAT1也提示不良预后。NEAT1直接结合YAP内在无序区，促进YAP液–液相分离（LLPS），形成富集转录机器的生物分子凝聚体，增强YAP介导的干性基因表达。细胞内NEAT1
v1还维持CD44表达，并通过GABARAP诱导自噬和放疗抵抗。
4.1.2 Lnc-ROR promotes CD133
+ tumor-initiating cell expansion via EV-mediated transfer（Lnc-ROR经细胞外囊泡传递促进CD133
+肿瘤起始细胞扩增）：在TGF-β刺激下，HCC细胞来源细胞外囊泡富集lnc-ROR，转移至受体HCC细胞后促进CD133
+肿瘤起始细胞扩增、成球能力及对索拉非尼和多柔比星的耐药；敲低lnc-ROR可减弱上述效应并恢复化疗敏感性。
4.1.3 CAF-derived exosomal TUG1 promotes HCC migration and glycolysis（CAF来源外泌体TUG1促进HCC迁移和糖酵解）：CAF分泌外泌体将TUG1递送至HCC细胞，TUG1海绵吸附miR-524-5p并上调SIX1，促进迁移、侵袭和糖酵解；沉默TUG1可减弱CAF外泌体效应。临床转移患者中TUG1和SIX1升高而miR-524-5p降低；体内沉默TUG1抑制肿瘤生长和肺转移。
4.1.4 CD90
+ CSC-derived exosomal H19 promotes angiogenesis（CD90
+CSC来源外泌体H19促进血管生成）：CD90
+肝癌干细胞来源外泌体富集H19，可促进内皮细胞血管生成表型和细胞间黏附。外泌体经动态光散射、Alix/Tsg101/HSC70蛋白免疫印迹和PKH26摄取验证，功能获得和丧失实验支持H19在该过程中的作用。
4.2 LncRNAs regulate HCC cell stemness via chromatin remodeling and epigenetic mechanisms（lncRNAs通过染色质重塑和表观遗传机制调控HCC细胞干性）
4.2.1 lncTCF7 recruits the SWI/SNF complex（lncTCF7招募SWI/SNF复合物）：lncTCF7在CD13
+CD133
+肝CSCs中高表达，其缺失损害自我更新和转移。机制上，lncTCF7将SWI/SNF染色质重塑复合物招募至TCF7启动子，增强TCF7表达并激活Wnt/β-catenin，驱动肝CSC自我更新。
4.2.2 HAND2-AS1 recruits the INO80 complex to promote CSC stemness maintenance and control differentiation（HAND2-AS1招募INO80复合物促进CSC干性维持并控制分化）：HAND2-AS1人鼠保守，在肝CSCs中高表达，对自我更新和肿瘤起始必需。其招募INO80至BMPR1A启动子，诱导BMPR1A表达并激活BMP信号。PDX模型中，靶向HAND2-AS1的ASO联合BMPR1A siRNA增强抗肿瘤效应；肝细胞特异性敲除Hand2-as1或Bmpr1a损害BMP信号并抑制肝癌发生。临床转化仍面临体内递送、脱靶、毒性和人体验证等挑战。
4.2.3 lncHDAC2 promotes cellular stemness remodeling via recruitment of the NuRD complex and activation of hedgehog signaling（lncHDAC2通过招募NuRD复合物和激活Hedgehog信号促进干性重塑）：lncHDAC2在肝CSCs高表达，招募NuRD至PTCH1启动子，抑制PTCH1并去抑制Smo，激活Hedgehog下游靶基因，促进自我更新。Smo抑制剂cyclopamine损害肝CSC自我更新；HDAC2与HCC严重程度正相关，PTCH1与进展负相关。
4.2.4 LncBRM-mediated BRM/BRG1 switching and YAP activation are critical steps in CSC self-renewal（LncBRM介导BRM/BRG1转换和YAP激活是CSC自我更新的关键步骤）：LncBRM在肝CSCs高表达，结合BRM并启动BRM/BRG1转换，促进含BRG1的BAF复合物形成，激活YAP1信号。LncBRM与NEAT1机制互补：前者经染色质重塑上调YAP1转录，后者经蛋白相分离放大YAP功能，提示YAP活性受多层调控。
4.3 LncRNAs regulate the Wnt/β-catenin pathway via distinct mechanisms（lncRNAs通过不同机制调控Wnt/β-catenin通路）
4.3.1 Lnc-β-Catm stabilizes the β-catenin protein via methylation（Lnc-β-Catm经甲基化稳定β-catenin蛋白）：lnc-β-Catm在HCC肿瘤和肝CSCs中高表达，其缺失损害CSC自我更新和肿瘤传播。该lncRNA与β-catenin及EZH2形成三元复合物，促进β-catenin甲基化，抵抗泛素化降解，稳定β-catenin并维持Wnt/β-catenin信号。EZH2甲基转移酶小分子抑制剂可能干扰该致癌回路。
4.3.2 DANCR functions as a ceRNA to reduce β-catenin expression（DANCR作为ceRNA调控β-catenin表达）：DANCR在HCC-CSCs中过表达并具预后意义。其作为分子海绵吸附miR-199a、miR-214和miR-320a，解除这些miRNA对CTNNB1的抑制，增强Wnt/β-catenin信号和干性特征。
4.3.3 Epigenetic regulation by MALAT1（MALAT1的表观遗传调控）：MALAT1经Wnt/β-catenin通路调控HCC干性。敲低MALAT1下调β-catenin、Stat3、c-Myc及CD133、CD90等干性标志物，并降低ALDH-1活性和成球效率。MALAT1–Wnt轴是可靶向环路，其在外泌体中的传递及CAF-HCC间串扰值得研究。
4.4 Inflammatory signaling and the STAT3 pathway（炎症信号与STAT3通路）
4.4.1 Direct transcriptional repression by lnc-DILC（lnc-DILC的直接转录抑制）：lnc-DILC是少见的抑干性lncRNA，在HCC组织和CSCs中低表达。其可直接结合IL-6启动子抑制IL-6转录，阻断IL-6/STAT3信号，抑制CSC扩增。lnc-DILC水平与IL-6、EpCAM和CD24相关，并可预测早期复发和生存；CAF来源外泌体lncRNAs可能通过抑制lnc-DILC或替代机制增强IL-6/STAT3信号。
4.4.2 Recruitment of transcription factors by lncSox4（lncSox4招募转录因子）：lncSox4在TICs中高表达，与STAT3物理互作并招募至Sox4启动子，启动Sox4转录，形成lncSox4–STAT3–Sox4正反馈，维持TIC特性。lncSox4和Sox4表达与HCC发展及临床严重程度相关。
4.5 BMP signaling and developmental pathways（BMP信号与发育通路）：HAND2-AS1通过INO80上调BMPR1A并激活BMP信号。BMP信号通常促进分化、抑制增殖，但适当水平对肝CSC干性维持似有必要，可能微调自我更新与分化平衡；其背景依赖性效应仍需进一步研究。
5 Functional classification and cross-talk of lncRNA regulatory networks（lncRNA调控网络的功能分类与串扰）
5.1 Convergence on core stemness pathways（汇聚于核心干性通路）：尽管lncRNA种类多样，但显著汇聚于有限核心通路。Wnt/β-catenin是最常被靶向轴，至少lncTCF7、lnc-β-Catm、DANCR和MALAT1以不同机制激活该通路。YAP信号可由lncBRM的染色质机制和NEAT1的相分离机制共同激活。功能冗余可能解释单靶点治疗耐药，但该假设尚需实验验证。
5.2 Complementary mechanisms: transcriptional, posttranscriptional, and protein-level regulation（互补机制：转录、转录后和蛋白水平调控）：转录控制包括直接DNA结合（如lnc-DILC结合IL-6启动子）和染色质重塑复合物招募（如lncTCF7-SWI/SNF、HAND2-AS1-INO80、lncHDAC2-NuRD、lncBRM-BAF）。转录后调控主要为ceRNA机制。蛋白水平调控包括翻译后修饰、蛋白稳定性及LLPS等。多层调控使干性程序稳健，有效干预可能需要同时靶向多个节点。证据分层从直接外泌体转移至需进一步验证的细胞内研究。
5.3 Integration of signals from the tumor microenvironment by lncRNAs（lncRNAs整合TME信号）：TGF-β可通过TGF-β/Sox2轴调控H19，连接CAF激活与干性维持。巨噬细胞诱导H19经miR-193b/MAPK1轴促进HCC侵袭。HCC-MSC共培养可诱导lncRNA-MUF，通过ANXA2结合和miR-34a海绵激活Wnt/β-catenin和EMT。MSCs也可经KDM6B/TIAM1轴诱导DNM3OS增加侵袭和转移。上述证据支持基质细胞、HCC细胞和lncRNAs间信号传递，但lncRNA包装入外泌体及对受体细胞干性的系统影响仍缺乏研究。
6 Conclusion（结论）：HCC相关外泌体lncRNAs调控干性具有重要转化潜力。现有证据表明lncRNAs通过染色质重塑、LLPS和信号通路调控维持肝CSC特性。CAF来源外泌体NEAT1经YAP相分离促进干性是直接概念验证。本综述将独立研究整合为系统调控网络，提示靶向Wnt/β-catenin、YAP和STAT3，单用或联合上游lncRNAs，可能抑制肿瘤细胞干性。基质或外泌体来源lncRNA种类功能、分选摄取机制及临床验证仍是重要挑战。
7 Discussion（讨论）：液体活检因非侵入性和动态监测能力受到关注，循环lncRNAs具诊断生物标志物潜力。H19在HCC中再激活，血浆水平与BCLC分期相关，治疗后下降、复发时升高。循环EV NEAT1与不良预后相关；低水平抑癌lnc-DILC预测早期复发。治疗上，ASO策略有前景，HAND2-AS1 ASO联合BMPR1A敲低显示协同效应，H19 ASO减少CSC自我更新。小分子抑制剂可靶向lncRNA–蛋白互作，如破坏NEAT1–YAP LLPS。未来需系统表征基质或外泌体来源lncRNA、阐明分选和摄取机制、开展临床验证，并研究体内外泌体转移时序和定量。单细胞测序、多组学、机器学习和计算建模可能促进CAF–lncRNA–CSC轴研究。叙述性综述存在选择偏倚等局限。
