（接上一页）片段是由包括caspase依赖性核酸酶（3）在内的内源性内切核酸酶（1，2）的作用产生的。这种DNA的片段化是凋亡的显著特征之一。典型的凋亡细胞DNA被切成一系列以180-200bp长度为单位的多聚体，这些多聚体片段在琼脂糖凝胶上呈梯状分布。DeadEnd™比色细胞凋亡探测系统对凋亡细胞片段化DNA进行末端标记。此系统基于末端脱氧核苷酰基转移酶介导性dUTP切口末端标记标记(terminal deoxynuedeotiodyl transferase-mediated dUTP nick and end labeling, TUNEL)或TdT介导的切口末端标记来鉴定。图1列出鉴定步骤。DeadEnd™系统原位标记的片段DNA既可是培养细胞中的，也可是组织切片中的。利用这一方法凋亡细胞核可被染成深棕色。

凋亡的细胞模型
    一个研究比较透彻的细胞凋亡模型是Fas介导的细胞死亡。此过程可以通过Fas配体（FasL）与Fas受体的连接而实现，或是通过抗体受体的交联（5，6）。Fas诱导的细胞凋亡在配体结合后的几个小时便可以检测到而且不需要蛋白质的合成（5，7）。比较确信的是Fas结合导致一个蛋白酶级联反应的激活。这个级联反应最终使死亡信号转导（8）。我们在Jurkat细胞中（一种人T淋巴细胞系）使用抗体交联Fas来展示DeadEnd™比色细胞凋亡探测系统的应用。图2中明显显示在抗Fas处理后许多细胞被该系统标记，而在未处理的对照组中只有极少被标记。

    此外，Promega公司的CellTiter96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assays 与CytoTox96® Non-Radioactive Cytotoxicity Assays顺序使用可作为附加标准衡量诱导凋亡后16小时的细胞活力（图3）。CellTiter96® AQueous Assays衡量四氮唑的生物还原，MTS是一种量化细胞生活力的方法(9)。CytoTox96 Assays衡量随细胞膜破裂所释放的乳酸脱氢酶的量。 CellTiter96® AQueous Assays揭示随诱导凋亡的Fas抗体加入Jurkat细胞量的增加，存活细胞总数减少，而与伴随的是由CytoTox96® Assays检测出的死亡细胞数增加。（图3）这两种方法的结果与利用DeadEnd™

图2 抗Fas单克隆抗体（50ng/ml;克隆CH-11,Oncor）诱导的Jurkat细胞的细胞凋亡。
DeadEnd™比色法细胞凋亡检测系统标记Fas单克隆抗体处理过的细胞核（16小时），而未处理过的则未被染色(右下角插图)。

图3 不同浓度的抗Fas单克隆抗体诱导的Jurkat细胞的细胞凋亡。 
    为诱导细胞凋亡，将10⁶ cell/ml Jurkat与滴定度为0-50 ng/ml的Fas单克隆抗体保温。37℃ 5%的CO2中16小时，用CellTiter96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay和CytoTox96®Non-Radioactive Cytotoxicity Assay测定细胞生活力（490 nm吸光度）。方法依照相应技术手册所述(9,10)。

系统检测Fas介导的Jurkat细胞凋亡模型所显示的凋亡细胞结果一致（图2，3）。用茴香菌素诱导HL-60细胞凋亡来比较CellTiter96® AQueous Assays、CytoTox96® Assays与CaspACE™荧光测定法的效果，结果是相似的。

凋亡的动物模型
    细胞凋亡的动物模型有助于将体内的细胞程序性死亡过程分段详细研究。轴突横切术（Axotomy）诱导的鼠脑神经元死亡是研究较完善的模型。鼠脑中视皮层的单层病灶可以导致外侧膝状体核（LGN）与病灶同侧

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