炎黄血统入籍日本：质粒纯化之Clontech篇[选购宝典]

生物通技术专评：在分子生物学领域，用过流式细胞仪得人应该都知道BD公司。美国BECTON DICKINSON ( B-D )公司是一家著名的医疗设备及医疗技术公司，1897年由Maxwell W. Becton和Fairleigh S. Dickinson共同创建，总部设于美国的新泽西州，在世界90多个国家和地区设有办事处或分支机构，全球雇员二万多人，2004年营业额为49亿美元。参加过BD的学术宣讲会，印象中是十分大气的，不愧是在FORTUNE上名列前茅的企业，另外就是来的doctor非常帅气，人也很nice，让众多女生围绕着去问问题。

    BD于1999年收购了Clontech公司，成为其旗下分子生物学这一块的主力军。Clontech是1984年由华人方瑞贤创办的，这也是为什么说Clontech产品中流淌着炎黄血脉。方瑞贤创办的是全美第一家，也是亚裔创办的最大的分子生物公司，更重要的是Clontech 建立了生物技术中建立基因文库的模式。在Clontech 被收购时已有四百名员工，包括六十五位博士，拥有五十多项专利，产品已达两千多种，堪称全球数一、数二的基因库，提供全球三十多个国家基因实验室或是学术界做研究之用。该公司有曾于一九九四、一九九五、一九九八及一九九九年被圣荷西及旧金山商业报纸选为一百个成长最快的私人公司。很可惜，这篇文章成文是在6月，刚刚跨入7月，生物通就得到消息，日本Takara公司以6千万美元全资收购了Clontech。想当年BD收购Clontech曾经花费了2亿零1百万美元，可惜BD的商业模式并不适合Clontech的发展，Clontech的销售一路下滑，2004年仅6千万美元销售。最后以区区6千万美元被贱卖――要知道Clontech成立比Invitrogen还早，当年的锋头比Invitrogen还劲，可是现在二者的发展已经不可同日而语了――今天的Invitrogen到处收购各领域的生物技术公司，风光的很呢。收购的细节可参考生物通7月12日今日动态生物通财经：Takara收购Clontech。

    尽管曾经的炎黄血统最终入籍日本，不管日后的发展如何，今天的Clontech依然是金字招牌，良好口碑。Clontech核酸纯化系列分类和设计都很像是Qiagen的翻版，坊间有谣言说是由于当年Clontech挖了Qiagen墙角，当然这在如今已经不可考，也没有必要当真。实际上Clontech自己声明核酸纯化系列是由Macherey Nagel, GmbH,代工生产的。Clontech拥有两个系列注册专利的质粒提取技术，一个是NucleoBond®系列，另一个是NucleoSpin®系列。NucleoBond®柱非常适合做转染级别的质粒大量提取。在进行大量提取的时候，裂解液先通过一个“风琴式折叠”过滤器而不是采用离心或真空抽滤筒，为的是有效防止产生剪接作用使DNA断裂；上清液过柱，利用阴离子交换技术在低盐浓度下有选择地吸附带负电的核酸。最后高盐洗脱并经过异丙醇沉淀得到相当于多次CsCl超速离心纯化级别的超纯质粒DNA。纯化后的DNA可以直接用于大多数细胞株的转染或者其它需要高纯度DNA的用途。和Qiagen一样NucleoBond系列从Mini到Giga也一应俱全，Clontech也有为转染原代细胞专门设计的去内毒素的EF试剂盒(<0.5 EU/µg of plasmid DNA).，从Maxi到Giga都提供，不妨参考生物通前面的介绍选择适合自己的质粒提取试剂盒——Qiagen篇。

    其中，Clontech还专门为大载体细菌人工染色体BAC设计的kit，从粘粒、P1噬菌体、PAC、BAC都可以从细菌中提取出来。如果你一直为提取不出BAC而苦恼，不妨试一下这款产品。

    NucleoSpin®柱是适合快速离心方式的质粒纯化，也可用于基因组DNA和总RNA快速提取。此柱采用的是经过改良的硅胶膜，可以在高盐浓度进行吸附，用低盐或水溶液洗脱。对于低通量的小量提取可以通过台式离心机快速地完成，一次可纯化30ug质粒DNA。NucleoSpin Plasmid Kit的Buffer设计和Qiagen很相似――而且也很贴心：对于一些核酸酶含量高的大肠杆菌菌株，比如HB101，JM系列，常规的质粒快速纯化结果并不理想，用这个Kit的A4 Buffer多洗一次就可以有效解决问题。对于较大的质粒，同样有很多有用的建议。Clontech也有一个NucleoSpin Quickpure Kit，和前者的区别在于将质粒离心过柱之后的2次洗涤合而为一，将纯化时间缩短到11分钟以内，不过这个Kit一次最多只能纯化15ug质粒，是特别为一次要纯化多个质粒而设计的，例如克隆后的筛选，比较节约时间而不需要特殊的工具。Clontech同样提供一系列高通量提取试剂盒，可以通过离心和真空管装置从每个96孔板中提取5-30μg/孔 DNA。和Clontech的文库技术比起来，它的质粒提取纯化技术相对来说没有那么鲜明的特色，不过胜在价格比较可亲，这回过户到以低价著称的Takara 手里，大概会更平民化一点吧。(生物通作者 Serana & 吴青,未经作者许可禁止转摘)