谁可小看“蛋白标准”（中）[选购宝典]

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2. 预染蛋白分子量标准

    预染蛋白分子量是一些纯化好的蛋白混合物，通过与染料共价耦联，在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到。预染蛋白分子量的出现方便了我们的实验，这种蛋白分子量标准可以帮助我们在电泳时、电泳后，以及转膜后监测电泳情况和估计迁移率——比如，已知垂直电泳最佳分辨区域大约在胶的2/3处，如果使用预染Marker就可以预测目标蛋白进入最佳分辨区时停止电泳以得到最佳分辨效果；如果观察到Marker电泳异常也可以及时终止电泳；另外在Western Blot转膜以后可以直接观察蛋白转膜是否完全，还可以在膜上标记蛋白分子量，所以吸引了许多实验室人员购买预染蛋白标准。值得注意的是预染蛋白Marker与染料共价耦联，所以在不同的缓冲条件下电泳时迁移特性可能会发生某些变化，可能导致一些偏差，所以不太适合精确定位蛋白——不过多数情况下Marker的条带未必能和我们的目标蛋白完全一样，我们得到的也不过是一种相对Marker指示的参考大小，最后都需要Western来定性，所以如果不是要区分大小相近的条带，预染Marker还是很好用的，而且也可以和未染色的蛋白标准一起使用。预染Marker的条带大小也是厂家根据多种条件下实验数据给出估算的结果——ABI的4色荧光测序可以精确到千位碱基的不也是“计算”出来的吗？

 

预染蛋白标准可以分为两种：单色预染和多色预染，见下表（表中蛋白ladder是根据一般实验结果得出的），其实区别就在于帮助在实验过程中辨认某个条带的大小——Marker条带越多参考价值越大，可也就越难辨认区分，如果用不同的颜色来区别就比较好辨认啦。再说了，那么沉闷的电泳实验中跑出五颜六色的彩虹Marker，绚丽如同我们美丽的梦想，这时心情想必会愉快一些的哦，哈哈。单色的Marker通常是利用其中某些条带加倍浓度来提示其大小的。还有一点特别要注意，由于转膜是一个将胶里的Marker浓缩在洁白的膜上，所以需要的上样量相对少一些，如果想要在电泳过程中看到美丽的“彩虹”，或者单色的Marker往往需要比说明书里多加一些Marker的。

 

①     单色预染蛋白标准

①      

厂家	产品名	Protein Ladder(kD)	包装价格	用量
Bio-Rad	Precision Plus Protein All Blue Standard	250, 150, 100, 75, 50, 37, 25, 20, 15, 10	500ul	可用50次
	Prestained SDS-PAGE Standards, broad range	7.1-209	500ul	可用50次
	High range	48-204	500ul	可用50次
	Low range	20-103	500ul	可用50次
Invitrogen	BenchMark Fluorescent Protein Standard	11-155	125ul  ￥2764	Mini-gel 2-5ul Standard 5-10ul
	SeeBlue(Plus2) Prestained Standard	4-250 (plus2 多两条带)	500ul ￥1537	Mini-gel: 10ul(electrophoresis) 3ul(blotting) Standard-gel: 20ul(electrophoresis) 7ul(blotting)
NEB	Prestained Protein Marker	175, 83, 62, 48, 33, 25, 17, 7	0.53ml/￥475 1.05ml/￥1080 5.25ml /￥4320	Mini-gel: 15ul(electrophoresis) 6ul(blotting) Standard-gel: 30ul(electrophoresis 12ul(blotting)
Pierce	BlueRanger Prestained Protein MWM Mix	220, 1.4, 76, 45, 33, 26, 18		48-96 gel lanes
BBI	Pre-stained Protein Marker	97.4, 66.2, 42.7, 31, 14.4	25 Appli.￥168 200ul   ￥120	可供50次上样， 可供20次上样
MBI	Prestained Protein Molecular Weight Marker	119, 19, 46, 31, 24, 19	2X0.25ml￥420	Mini gel: 5ul/well Large gel: 10ul/well

 

    在以上这些当中比较便宜的是NEB、BBI和MBI的蛋白标准了，其它相对而言就比较贵了，像Pierce的BlueRanger Prestained Protein MWM Mix每用一次光Marker就要大概人民币110元，真是令人咋舌，不过也是物有所值：首先这种蛋白标准包装十分方便携带和使用，它是常温储存在48孔板中，每次使用不需解冻，也不会降解，只要用枪头像将吸管插入刺穿外层薄片，然后将枪头中的10ul去离子水注入Marker干粉中再吸起来就可以了，这种独立包装也可以防止污染；其次这种蛋白Marker分子量范围较广，从18.5kD到215kD（4-20%SDS-PAGE），而且难得的是在凝胶上和转移膜上各条带分布水平和显色水平一致；还有就是这种Marker也可用于染色（考马斯亮蓝染色和银染）。这各种高品质的表现，也难怪Pierce要定位在这么高的价位了。

 

②     多色预染蛋白标准

厂家	产品名	Protein Ladder(kD)	包装价格	用量
Invitrogen	BenchMark Prestained Protein Ladder	181.8, 115.5, 82.2, 64.2, 48.8, 37.1, 25.9, 19.4, 14.8, 6.0	2×250ul ￥1961	Mini-gel: 10ul(electrophoresis) 5ul(blotting) Standard-gel: 20ul(electrophoresis) 10ul(blotting)
	E-Page SeeBlue Prestained Protein Ladder		500ul ￥1537	E-PAGE 96 gel: 10ul(electrophoresis) 5ul(blotting)
	MultiMark multicolored Standard	3-250	500ul ￥1766	Mini-gel: 10ul(electrophoresis) 3ul(blotting) Standard-gel: 20ul(electrophoresis) 7ul(blotting)
PE	Multicolored Protein Marker	High range 29-205 Low range 6.5-45 Wide range 6.5-205	500ul
Pierce	Trichrom protein Marker	16.5-210		48-96 mini-gel lanes
GE	Rainbow Molecular Weight Markers	High range 10-250 Low range 2.5-45 Wide range 14-220
Bio-Rad	Precision plus protein Dual Color Standard	10—250		可用50次
Cambrex FMC	ProSieve  Color Protein Marker	10, 15 ,20, 25, 40, 50, 80 ,125 ,190	100ul/529 500ul/1775	8-10ul/gel

 

    能够出这一系列Marker的都是些实力雄厚的公司，比如Invitrogen，比如PE。但其实，这种蛋白标准与上面的单色预染蛋白标准相差不大，就像Pierce的TriChromRanger Marker与另一个产品BlueRanger基本就相似，除了它的110kD条带是红色，而16.5kD条带是紫色。因此价格方面这两种预染蛋白也不相上下，一般来说，Marker条带越多越有参考价值，当然也会稍微贵一些，所以首选是有和自己目标条带最接近的Marker，如果没有就找条带多的和比较均匀的，而且还要考虑每次上样的成本，不要光看价格和包装大小了。各位读者就按自己的喜好购买吧。（张迪）