中国的定量PCR——达安基因[创新技巧]

    有关Taqman探针荧光定量PCR技术说了这么多，好像提到的都是来自国外的生物技术公司，说起来国内定量PCR技术确实属于半真空的状态，尤其是在核心技术这一方面。但是其中还是有值得一提的国内定量PCR的中流砥柱型企业：广州中山大学的达安基因股份有限公司（以下简称达安基因）。

  之所以会说达安基因是国内定量PCR技术——尤其是在分子诊断技术方面——的中流砥柱，以下的理由也许可以打动你：

• 国内唯一一家有PCR相关发明中国专利的企业（这一专利获得了国家专利金奖，见国家专利金奖公示：一种荧光定量PCR技术）
• 全球第一份荧光PCR试剂盒新药证书（1999年，乙型肝炎病毒PCR荧光检测试剂盒，新药证书号：国药证字（1999）S-50号）
• 已获得5种荧光PCR试剂盒新药证书和试生产/生产文号，并且获得了国家药监局的GMP认证
• 其核心产品荧光基因探针定量PCR诊断试剂盒的研制成功填补了国内市场（相关许多方面）的空白
• 已完成研制开发的产品数量达60多种，占据了国内市场大约70%的份额

  这家从校办工厂一路做到上市公司，集合了大量博士、硕士的国内企业经过短短几年的发展成为了的分子诊断业内的佼佼者，也成为中国生物技术产业的真正成功范例，她值得称道的地方在哪儿呢？

一颗红心 两手准备

  达安基因有一项核心定量PCR技术，其实这也是达安核心所在：荧光定量聚合酶链式反应方法专利。这个方法基本上沿用的就是Taqman探针的方法，虽然在原理上不出奇，但是达安所面向的是更为广阔的病原体检测和诊断领域：在这个领域里，已知病原体所对应的检测标志物序列都是已经明确验证过的，所以达安提供的是即用型的整个定量PCR体系——包括探针，引物，Buffer，Taq酶，也就是除了模板以外的所有成份——确保了检测反应的两大基本要求：灵敏性和可重复性。

灵敏度是评价一个诊断检测试剂盒极其重要的治标，试想一下，一个病患如果其处于疾病早期阶段，自然疾病标志物量小，如果能有效的检测出这种疾病，就能帮助病患提前接受治疗，而这就需要高灵敏度。达安基因的检测试剂盒在这一方面国内行业中确实做的不错，当然这不是空话，要那事实说话。见下图，在罗氏试剂盒提取乙肝标本之后，不同试剂进行定量PCR反应，左为达安基因试剂所获得的曲线，右为国内另一品牌试剂。

 

  在红色圆圈标记处，第一张图比第二张图低浓度拐点更加明显，说明在同一条件前提下（同样来源样品），前者的灵敏度比较高高（少量模板同样可以出现清晰拐点），另一方面也说明前者不易出现假阳性错断（精确度高，因此数据可信度高）。

重复性对于诊断试剂盒标准化也是非常重要的，临床诊断讲究的是完整性和精确性，这两方面就定量PCR方法而言都需要样品制备、标准化仪器和试剂来确保，这里的一个重要指标就是可重复性。毕竟蛋白是执行功能载体，在诊断领域，核酸检测可靠性本来就不如蛋白检测，加上PCR反应本身极度灵敏更容易放大误差的特性，因此对定量PCR结果的可重复性要求自然更高。一般而言根据多次实验可以求得目的基因初始浓度的变化的最小值，这个值越小说明这一反应体系精确度越高，这也就是所谓的可重复性了。

  这个一方面可以通过重复实验扩增曲线之间的平行性来判断——平行说明各反应管扩增效率相近，而外标准定量方法就是建立在扩增效率一致的基础上（见以上扩增曲线）。另一方面也可以通过比较多个重复反应不同浓度的Ct值变化情况，即CV值，见以下数据，在不同浓度下明显的可以看出达安基因试剂CV值变化波动得比较小（CV≤2％）。

厂家	稀释倍数（血浆10倍倍比稀释样品，-2即用血浆稀释样品100倍）	CV值（变异系数）
达安	-2	0.67%
	-3	1.61%
	-4	0.68%
	-5	1.21%
国内某产品	-2	2.20%
	-3	1.39%
	-4	1.63%
	-5	0.99%

　

良好的市场定位

  达安基因从发展初始给自己的市场定位就显现出了其企业理念，发展至今更是在完备的产品，优良的市场服务等方面进行了全面的市场定位，提供给用户性价比超值的产品。

  所谓“良好的市场定位”其实也就是达安基因对自己产品的正确评估，由于国内定量PCR分子诊断市场落后了国外几十年，因此在核心技术，产品系列成熟等方面都有极大的优势——虽然说达安基因获得全球第一份荧光PCR试剂盒新药证书，但这主要是因为国外许多政府审批程序比我国复杂，时间长。达安属于在国内开始定量PCR分子诊断研究比较早的公司，如果希望在众多强手林立的诊断市场创出自己的天地来就需要有良好的市场定位，由于定量PCR检测诊断对于国内病患最大的一个门槛就是价格，许多病患因为国外昂贵的诊断试剂费用望而却步，因此提供性价比高的产品就是达安基因成功迈出的第一步。

  目前达安不仅在原有的基础上不断推出了新的试剂盒以及检测技术服务，而且自主研发生产了荧光定量PCR仪 DA7600，这款性价比极高的定量PCR仪也是争取降低国内患者诊断费用的一个有效途径，也进一步体现了达安基因良好市场定位的准则。 详细请见http://www.ebiotrade.com/custom/daan/060509/index.htm。

  虽然目前达安基因还只能算得上是一个中小企业，但是凭借其坚实的人才力量，勇于开拓的企业精神，达安这个朝气蓬勃的高科技企业有没有可能成为明天的ABI也许并不是一个美丽的梦。

     强大的美国生物技术产业不单满足自身国内的庞大需求，极大的促进了生物技术的进步，同时也积极对外扩张，2005年美国对海外输出的生物分析类产品总值超过50亿美元。反观中国有大量非常优秀的生物技术人员，但是中国的生物技术产业的发展却一直不尽人意，也许，达安，正是国内生物民营企业踏出的第一步...（生物通：张迪）