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全球各实验室如何进行RNAi实验?
【字体: 大 中 小 】 时间:2007年07月25日 来源:生物通
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对于那些之前在研究基因功能方面受到挫折的研究人员而言,体内RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术的出现就好像是救兵一般,令人欣喜。理论上体内RNAi能进行更加细致的敲除,从而研究人员能获得时间和空间调控的基因敲除效果。
对于那些之前只能用基因敲除小鼠来研究基因功能而备受挫折的研究人员而言,体内RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术的出现就好像是救兵一般,令人欣喜。基因敲除方法欠缺灵活性而受到很多限制,比如不可逆、是基因组整体敲除而非局部,不能用于关键基因,操作周期长等等;而相反,体内RNA干扰使研究人员在时间和空间上灵活调控基因敲除效果成为可能。
但是这并不意味着体内RNAi是一件容易完成的实验,实际上体内RNAi最令人困扰的难题是----递送---如何有效将siRNA传递到细胞内,即使在培养细胞中也是一样。就像来自Integrated DNA Technologies公司的Mark Behlke说的一样,“在体内,问题其实是一样的,不同的只是要更加困难十倍”。研究人员需要将siRNA导向指定的靶器官和靶细胞,有效的转染细胞,并且还要解决好毒性和脱靶的问题。
值得留意的是也有一些小技巧能解决一些问题,比如说,对于人工合成的siRNAs,可以利用一些阳离子脂质体来中和RNA的负电荷,从而使得这些RNA更容易通过细胞膜,或者进行化学修饰,保护RNA不受到核酸酶,免疫反应、其它脱靶效应的影响。还有就是合成27mers的RNA,其被吸收的效率更高些。
近期一些研究表明,通过病毒载体传送短发夹结构编码siRNA也许是一种更为有效的敲除方法。但shRNA表达水平各不相同,并且有些长效基因沉默(例如整合到染色体上)不适合一些实验应用的需要。新一代的传送方法,比如纳米粒子,PEG修饰脂质体(pegylated liposomes)初露曙光。可惜这些方法通常难以制备,除非你有在化学或者制药学方面的合作伙伴,否则“你只能从资料上查到它们,但是就是搞不到。”
对于第一次进行体内RNAi实验的研究人员来说,这些都是问题,ABI的Steven Suchyta说,“并没有什么捷径可以让你轻松过关,可以借鉴的只是经验”,以下就是一些经验之谈。
肿瘤敲除 |
特异靶向 |
(生物通:张迪)
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