浓缩蛋白样品的小工具：PAGE胶回收蛋白的后继步骤[新品推荐]

 

现在做核酸纯化成为“小菜一碟”某种程度上是因为有了Spin Cloumn——这种利用“bind-wash-elute”技术的过滤离心纯化柱使得核酸在高盐或者低盐条件下结合在柱子上，通过反复洗涤除去不能吸附的杂质，最后改变条件使之洗脱下来。

可惜，蛋白纯化永远也不可能象DNA纯化那么方便。因为一来要将某个蛋白从其他蛋白中分离出来并不容易。再者每个蛋白都有自己独特的“个性”——不同的等电点、疏水性、可溶性......一不小心蛋白就会变性失活。如何纯化有活性的蛋白一直是无数研究人员不断重复研究的课题。

蛋白样品的浓缩是蛋白纯化中一个小问题，可是比较讨厌。比如蛋白样品经过透析复性后体积变大，比如蛋白经过PAGE电泳后要回通过电洗脱收条带（参考从PAGE胶/琼脂糖凝胶中回收蛋白质/RNA/DNA的新工具），又比如要除去样品里面的SDS或者脱盐，从层析柱上收集的洗脱峰，都不可避免的要浓缩样品。如果实验室有条件自然可以选择真空浓缩或者冻干，没有条件的就需要用PEG或者干脆沉淀蛋白。

ProteoCon是一个利用“结合—洗涤—洗脱”技术的快速蛋白浓缩产品。这个技术是利用一种特殊的类似强离子交换树脂的微珠来吸附结合蛋白。由于离子交换基团是季胺基（quaternary amine），在整个工作的pH范围内（pH2-pH12)都保持带电和对各种等电点的蛋白的高吸附能力。

树脂微珠加入样品液中吸附蛋白，通过微型离心柱除去废液，再经过两次重复洗涤，最后就可以用少至50ul体积的洗脱液洗脱目标蛋白。

试剂盒有两种选择：D适合变性SDS-PAGE电泳凝胶中的蛋白电洗脱回收，而N则适合非变性胶中或者其他常规样品中天然活性蛋白的浓缩，浓缩后可以保持蛋白的天然活性状态，不会聚集，蛋白的回收率高达95%以上。

这个方法非常简单，但是却有广泛的用途：比如蛋白样品浓缩、脱盐、去除SDS、透析、复性、PAGE胶中回收样品、层析中收集洗脱峰浓缩等等。不过这个试剂盒只能适合微量的样品制备。因为每30ul的Beads可以吸附10ug的蛋白，而一个试剂盒提供的只有0.8ml—1.6ml的树脂微珠。好在300多人民币/10次的价格也只是小贵，但是对于实验室常用的微量制备来说真的是非常方便。

GeBA的产品都是研究人员在实验中总结所遇到的困难而开发的，虽然简单却能为实验带来许多方便。例如我们此前介绍的 从PAGE胶/琼脂糖凝胶中回收蛋白质/RNA/DNA的新工具 等等，是值得推荐的东西。（生物通版权所有，未经许可不得转载）