为Western blot注入新活力[选购宝典]

【字体: 时间:2009年09月27日 来源:生物通

编辑推荐:

  Western blot虽然是个老话题,但不时也会散发出新的活力。近红外染料标记的抗体为印迹形式增添了灵活性。这些抗体能够更准确地定量,线性范围比化学发光更宽,超过4个数量级。Pierce也推出了快速半干式转印仪,与Pierce的快速半干式转移缓冲液共同使用,7-10分钟内就能完成高效的蛋白转印。

Western blot总是离不开一对抗体兄弟——蛋白特异的一抗和物种特异的二抗。至于二抗上的标记,过去以辣根过氧化物酶居多。辣根过氧化物酶与显色底物相互作用,在膜上显出肉眼可见的条带。这种分析简单、灵敏,应用广泛,但是它不能定量。化学发光法的灵敏度更佳,且动力学范围更大,利于定量。但它的缺陷是信号很短暂,所有研究都必须在有限的时间内完成。

许多实验室现在开始对荧光标记的抗体表现出浓厚的兴趣。这种抗体能够直接检测,灵敏度高,且信号持久。绿色、红色的抗体已不稀奇,LI-COR公司还提供近红外染料结合的IRDye® 二抗,荧光发射波长分别为680 nm和800 nm。这样就能同时检测两个蛋白,而不需要剥离、再孵育。这些抗体能够更准确地定量,线性范围比化学发光更宽,超过4个数量级。近红外范围的背景低,信噪比更高。而且这些标记特别稳定,能保持好几年。

点击索取IRDye 二抗的更多资料!

近红外染料标记的抗体为印迹形式增添了灵活性。LI-COR的产品经理Tony Endozo谈到:“我们的用户非常具有创新性。主要的应用当然是Western blot,不过我们还可以进行细胞分析,In-Cell Western,在整个细胞的背景下分析目的蛋白。”这个过程包括培养细胞,然后直接放在板上分析,而不需要裂解细胞或变性蛋白。In-Cell Western很容易扩大到96或384孔板的高通量分析。另外,LI-COR还提供了Chemi-IR试剂,它结合了化学发光的HRP步骤和IRDye检测系统,将它们的优势合二为一。

转印仪器上同样有新选择。Pierce(Thermo Fisher Scientific)推出了快速半干式转印仪,能够迅速将蛋白或核酸从凝胶上转移至PVDF或硝酸纤维素膜上。与Pierce的快速半干式转移缓冲液共同使用,能在7-10分钟内完成高效的蛋白转印,与传统的45分钟相比,真是快了一大截。快速半干式转印的主要优势在于缓冲液消耗量减少,电场更均匀,转移效率高,时间更快。Pierce快速半干式转印仪一次能转4块mini-gel,通量比其他方法更高。当然,这个仪器也能进行传统的半干式转印,用你自己的缓冲液和protocol。想了解更多吗?请点击此处

Pierce快速半干式转移缓冲液的配方经过优化,适于快速的转移。它是10×的配方,使用前用超纯水稀释即可,也无需加入甲醇,更安全。它适用于大部分SDS-PAGE的凝胶,包括Tris-甘氨酸、Bis-Tris、Tris-HEPES和Tris-HCl。

Invitrogen在几个月前也推出了iBlot Western检测试剂盒,它与iBlot干转仪搭档,能将western检测从3小时缩短到25分钟。详细请看:25分钟完成Western检测?!看来,时间也不再是Western blot最大的纠结了。

(生物通 余亮)

订阅生物通快讯

订阅快讯:

最新文章

限时促销

会展信息

关注订阅号/掌握最新资讯

今日动态 | 人才市场 | 新技术专栏 | 中国科学人 | 云展台 | BioHot | 云讲堂直播 | 会展中心 | 特价专栏 | 技术快讯 | 免费试用

版权所有 生物通

Copyright© eBiotrade.com, All Rights Reserved

联系信箱:

粤ICP备09063491号