带你走进多重蛋白分析的世界（二）[选购宝典]

欢迎进入多重蛋白分析的世界。与单重分析相比，多重分析拥有一些独特优势。最明显的是，研究人员能够从少量的样本中获得更多的信息。同时，多重分析也更快，易于自动化，且更节约试剂。多重分析有两种主要形式：抗体芯片和基于微球的液相芯片。上一回生物通主要介绍了固相的抗体芯片，这次我们聚焦液相芯片。

在基于微球的液相芯片中，免疫检测不是发生在膜或者微孔板的平面上，而是微米大小的微球上。每个微球包含了一组独特的荧光基团，并与单个分析物对应。将不同的微球混成预混液，并与每个样品共同孵育。在读取分析时，仪器逐一拷问每个微球。

最知名的液相芯片平台莫过于Luminex公司的xMAP编码微球系统，它理论上实现了50-500重分析。另一个为人熟知的就是BD生命科学的Cytometric Bead Array（CBA）分析。但这里有个实际问题，那就是只有核酸型分析才能达到Luminex的多重极限。抗体的交叉反应性实际上限制了蛋白的多重分析。在研究蛋白时，芯片越大，交叉反应和干扰的可能性越高。

Luminex多重检测平台主要由4部分构成：生化试剂、微球、流体和光学设备以及高速电子处理设备。其核心技术是基于xMAP微球技术的液相芯片检测系统，在不同荧光编码的微球上进行抗原-抗体、酶-底物、配体-受体的结合反应及核酸杂交反应，通过激光分别检测微球编码和报告荧光来达到定性和定量的目的，一个反应孔内可以完成多达100种不同的生物学反应。

Luminex 多重检测平台最突出的优势在于：仅需少量样本即可同时定量检测同一样本中多个不同的目的分子。样本消耗量少，且操作简单快速，2-3小时即可完成。微球表面积大，每个微球上可固定10万个探针，保证了能最大程度与样本内的目的分子结合，提高检测灵敏度。最低检测浓度可达0.1pg/mL。Luminex平台可读取单个微球上的荧光信号，自动区分结合与未结合微球，特异性好。当然，同时检测一个样本的多项指标可节约时间、样本、试剂、耗材和劳动，降低检测成本，提高分析效率。

Luminex的模式有点像苹果，就是它研发一个开放的检测平台，所有的开发商都可以在这个平台上开发多重检测的试剂。当然，Luminex的准入标准要比苹果更高，产品开发的难度也更大。

Luminex平台有三种形式。Luminex 100/200（及Bio-Rad的Bio-Plex 200）和Luminex FLEXMAP 3D（Bio-Plex 3D）系统是基于流式的，分别支持100和500个微球通道。如同简装的流式细胞仪一样，这些系统拷问每个反应。

而MAGPIX是默克密理博携手Luminex于2010年隆重推出的新一代磁珠多重检测系统，主机采用了革命性的光学系统及流路系统，使得新的MAGPIX结构上更加紧凑，在光路设计上采用了全新的LED激发光源及高分辨率的CCD成像技术，配合功能强大的xPONENT软件，可以实现单个样品多达50种分析物的多重检测。默克密理博为MAGPIX产品专门推出了多达25种Milliplex试剂盒，涵盖了包括转化医学在内的代谢疾病、炎症、心血管系统疾病、神经科学、信号转导、肿瘤标志物等多个方面。索取资料

Luminex多重检测平台广泛应用于细胞因子检测、病原体的检测和分型、HLA分型、细胞信号转导通路研究以及过敏原筛选、自身抗体筛查、肿瘤标志物检测等诸多方面。目前多家公司已推出了商品化的液相芯片检测试剂，比如Affymetrix、Bio-Rad、默克密理博、R&D Systems及Life Technologies等。（未完 待续）

（生物通 余亮）

延伸阅读：

带你走进多重蛋白分析的世界（一）

带你走进多重蛋白分析的世界（三）