带你走进多重蛋白分析的世界（三）[选购宝典]

欢迎进入多重蛋白分析的世界。与单重分析相比，多重分析拥有一些独特优势。最明显的是，研究人员能够从少量的样本中获得更多的信息。同时，多重分析也更快，易于自动化，且更节约试剂。今天我们谈谈另一款畅销产品，BD生命科学公司推出的基于流式细胞检测平台的液相芯片——BD Cytometric Bead Array（简称CBA）。

欢迎进入多重蛋白分析的世界。与单重分析相比，多重分析拥有一些独特优势。最明显的是，研究人员能够从少量的样本中获得更多的信息。同时，多重分析也更快，易于自动化，且更节约试剂。多重分析有两种主要形式：抗体芯片和基于微球的液相芯片。

上一回生物通介绍了Luminex的液相芯片。今天我们谈谈另一款畅销产品，BD生命科学公司推出的基于流式细胞检测平台的液相芯片——BD Cytometric Bead Array（简称CBA）。

CBA是利用一系列荧光强度不同的微球，同时对样本中的多种可溶性蛋白进行分析的流式检测方法。每个CBA微球大小一致，具有特定的荧光强度，包被有适用于特定分析（如其它抗体或者可溶性蛋白）的特异性捕获抗体，提供了类似ELISA孔板的捕获表面。当微球和待测样品溶液混合后，微球上的特异性抗体就与样品（血清、血浆或者细胞培养液）中相应的抗原或蛋白结合，然后加入荧光标记的检测抗体，就会形成“三明治”夹心复合物。最后通过流式细胞仪对特异性目的蛋白进行检测。

CBA可轻松实现多重检测，最多可同时对一个样本中的72个目的蛋白进行精确定量。它的分析灵敏度高达2.8pg/mL，检测范围达0-5000pg/mL。操作简单省时省力，通过标准曲线定量蛋白浓度，整个流程只需要3.5h。另外，强大的软件可直接将目标蛋白的检测结果换算成标准浓度。

它的应用领域涉及眼泪、血清、唾液、细胞培养上清等样本中细胞因子、炎症因子水平的分析。CBA还用于细胞信号传导中磷酸化蛋白、凋亡相关蛋白分析，系统性红斑狼疮（SLE）和新生儿脓血症等免疫疾病的监控，肿瘤研究，药效评估，药物研发，疫苗研究，总体免疫功能分析等很多领域。随着FACSArray生物分析仪的诞生，CBA与FACSArray组成了液相蛋白高通量快速检测的黄金组合。

以上我们介绍了多重蛋白分析的主要平台。也许，你要说，这么多平台，不知如何选择，那么可从以下几个方面考虑。

首先，从技术上考虑。对于抗体芯片而言，难度不大，只要你做过Western或ELISA，开展多重分析就没有问题。至于CBA分析，因为是通过流式细胞仪检测的，所以你们实验室须有人熟悉这一操作。

其次，考虑你的钱包。有些多重分析可能需要添置一些新硬件。例如Clontech的抗体芯片，你需要一台芯片扫描仪。Luminex的液相芯片需要一台专门的检测仪。而CBA分析则需要流式细胞仪。

耗材的成本也并非无足轻重。我们须考虑每个样品的成本和每个数据点的成本。R&D Systems的Proteome Profiler Human Kidney Biomarker Array价格为6240元。试剂盒中有4张膜，每个样品的成本为1560元，每张膜包含38个不同的捕获抗体，因此每个数据点的成本为41元。

第三，比较一些分析的参数，如重复性、多重分析程度、可靠性和灵敏度。一些制造商提供新的分析形式，能提高灵敏度。BD的CBA Enhanced Sensitivity Flex Set System将微球分析的灵敏度从10 pg/ml降低到0.274 pg/ml，改善了35倍。

第四，考虑分析的灵活性。首先，在目录中找一找有没有你需要的分析。很多时候，我们的检测目标不一定与厂家的产品一致，这时候，我们要考虑定制分析是否可行，如何定制，以及每一批的最少定制量是多少。

最后，若是临床实验室，还要从临床的角度考虑。在处理临床样本时，每一微升都是宝贵的。考虑你的样本体积，以便得到你需要的数据。同时，你的分析形式是否与临床样本形式兼容？例如，粘稠的样本可能会阻塞流式细胞仪。（完）

（生物通 余亮）

延伸阅读：

带你走进多重蛋白分析的世界（一）

带你走进多重蛋白分析的世界（二）