2012聚焦转染：第三站QIAGEN[选购宝典]

编者按 2005年，生物通曾重磅推出“聚焦转染”专题，详细介绍了各大公司的转染试剂，并总结了转染过程中的一些注意事项，备受好评。如今，七年过去了。转染市场风云变幻，多个新产品涌现而出，一些旧产品更弦易主。我们觉得，是时候推出更新版的转染专题啦。于是便有了这个“2012聚焦转染”专题。

时光荏苒，岁月如梭。一转眼，七年已经过去了。在上一次的转染专题中，QIAGEN的中文名还是快而精呢，如今，已改成凯杰了。虽说不如快而精通俗，但好像也更符合其跨国公司的身份。在转染试剂方面，QIAGEN也推出了不少新产品，尤其在RNA转染这块，产品颇具特色。不过，让我颇为困扰的是，这些产品的名字都很雷同，大多是**Fect，单从名字上根本无法判定其用途或特点，相信各位读者也有同感。于是我整理出了下表，方便大家阅读。

目的	转染试剂	特点
小分子RNA转染	HiPerFect	siRNA/miRNA的真核细胞转染，特别适合低浓度siRNA转染
	HiPerFect HTS	siRNA/miRNA的高通量真核细胞转染
	FlexiTube siRNA Premix	siRNA与转染试剂的预混液（人/小鼠）
mRNA转染	TransMessenger	siRNA-质粒DNA的高效共转染或mRNA转染
DNA转染	Attractene	所有贴壁细胞的转染，包括难转染的细胞
	PolyFect	COS-7、NIH/3T3、HeLa、293和CHO 五大细胞系的DNA转染
	Effectene	广泛细胞系的DNA转染，特别针对原代细胞和敏感细胞转染有效
	SuperFect	大多数细胞系的DNA转染

小分子RNA转染

小分子RNA研究一直热度不减，之前是siRNA，现在是miRNA。于是QIAGEN陆续推出了多个小RNA转染产品，包括高通量转染试剂，以及siRNA与转染试剂的预混液，让大家省时省力，早发文章。

HiPerFect

HiPerFect是QIAGEN较早推出的小RNA专用转染试剂：这种非脂质体的脂质分子可以在siRNA低至100 pM浓度的条件下转染（推荐浓度是1 nM-5 nM），保持高效基因沉默的同时降低脱靶效应，正是这一产品的精髓所在。除了siRNA，HiPerFect还能够用于miRNA模拟物和抑制剂的转染，满足miRNA功能分析的需要。

HiPerfect可高效转染多种细胞类型，包括HeLa、HeLa S3、HEK 293、NIH/3T3、Huh-7、HepG2、MCF-7、HUVEC和NHLF等。对于原代细胞，产品手册中列出了转染原代HUVEC、成纤维细胞、角质细胞、上皮细胞和平滑肌细胞的操作步骤，相当贴心。

HiperFect转染试剂的方便程度也是独一无二的——你甚至可以在一天内完成整个接种到检测结果的转染实验，这对于高通量反应简直是求之不得的福音：转染前将细胞按比例接种到24孔培养皿中，培养基可以是含有抗生素和血清的，在37度培养箱中保温。用无血清培养基稀释siRNA，加入HiperFect转染试剂混匀并温育5-10min，将混合物逐滴加入培养皿中混匀，培养细胞直到适当的时候检测基因沉默效果。一天之内可以完成再次接种、转染到检测结果！这个快速操作流程简便到还可以用于“反向转染”，方便至极。

就价格而言，QIAGEN也是越来越平易近人了。在2005年的专题中，HiPerFect 0.5 ml的价格是2800元，而如今的目录价竟然只要1760元。在这个物价飞涨的年代，啥东西都是噌噌的往上涨，俺就没见过降价的东西，HiPerFect真是让人内牛满面啊。QIAGEN还提供0.1 ml的小包装（询价）和1 ml包装（3120元），当然，还有4×1 ml和100 ml的更大包装，选择多多。

欢迎索取HiPerFect转染试剂的更多资料

HiPerFect HTS

QIAGEN还带来了HiPerFect转染试剂的高通量版本 – HiPerFect HTS Reagent，能够高通量地转染siRNA/miRNA，适合通路分析、药物开发及miRNA功能研究。对于高通量实验而言，操作简便、结果可靠和经济实惠都很关键。HiPerFect HTS试剂能同时满足这几点。

HiPerFect HTS试剂提供了稳定可靠的转染，确保了高通量实验的一致性和可重复性。它的操作步骤也有所不同，目的是尽量减少耗材的使用，减少移液步骤，在节约资源和时间的同时也有利于标准化。

说明书中提供了在96孔板和384孔板中反式转染贴壁细胞的操作步骤。在操作过程中，细胞可在同一天接种和转染。具体过程是，siRNA先加入孔中，再加入HiPerFect HTS试剂，在复合物形成之后，将细胞加入孔中。

除了塑料耗材的节省之外，每次转染只使用少量的转染试剂，确保最大的经济效益，同时也不会折损结果的可靠性。HiPerFect HTS试剂本身也有一些优势，比如批次间一致性高，且稀释后的稳定性高。这些性质对于实际操作也蛮重要，例如，你可以在早上稀释，然后用一整天，转染效果也不会打折。

HiPerFect HTS试剂目前有三种规格。迷你版（0.1 ml）的试剂适合初实验，价格为590元，可用于4-10块 96孔板。而2×1 ml和6×1 ml的试剂分别为10120元和26560元。当然，如果真的用量很大，那应该会有一个不错的折扣。

FlexiTube siRNA Premix

FlexiTube siRNA Premix 是典型的省时省力型试剂，它以单管形式提供了您感兴趣基因的siRNA以及高效的转染试剂，无需混合，即可直接用于细胞转染。而传统的转染实验需要先稀释siRNA，再与转染试剂混合并孵育。相比之下，此预混液可节约大量的时间和劳力。同时，FlexiTube siRNA Premix的使用也减少了实验内和实验间的差异，保证了不同实验间的高度一致性。

此外，FlexiTube siRNA Premix也不仅仅是简单的混合，其中试剂与siRNA的比率已预先优化过，确保最高的转染效率和基因沉默。你无需优化siRNA与试剂的比例，可快速启动RNAi 实验，避免了冗长的实验优化过程。目前QIAGEN提供了针对人类和小鼠基因的FlexiTube siRNA Premix。

FlexiTube siRNA Premix中包含的FlexiTube siRNA是利用HP OnGuard siRNA Design 设计的，确保其具备高特异性。siRNA的设计基于人工智能设计程序，并结合大量的RNAi实验数据。同时使用最新的序列数据库及专利的同源性分析软件对siRNA 的设计进行检测。

大家肯定关心转染效率如何，当然这也是因细胞而异的。至于难搞的原代细胞和悬浮细胞，你可以尝试一下加大用量。反之，如果你还想降低siRNA的终浓度，当然也可以，只需要使用更少量的FlexiTube siRNA Premix。例如，使用建议量的一半，这样siRNA的终浓度即为12.5 nM。取决于不同的细胞类型，有时siRNA终浓度低至1 nM也能产生高效的基因沉默。

DNA的转染

Attractene

Attractene转染试剂是一种非脂质体的脂质分子，它能够高效转染各种贴壁细胞，包括难转染的细胞如HaCaT、MonoMac6和HCT116，也可以用于悬浮细胞（Jurkat、K562）。经过全球多个国家的客户试用，大部分反映转染效果类似或优于他们目前正在使用的转染试剂，而且普遍反映其毒性更小。一个成功的转染实验的关键因素是看转染试剂没有细胞毒性。如果对细胞的毒性太大，基因表达的模式可能改变，结果会变得不可靠。如果你现在正面临转染效率不高或毒性太大，不妨试一下Attractene。而且它的转染步骤经过改进，是一种“快进”模式，接种和转染可以在当天进行，更节省时间。

Attractene转染试剂适合于瞬时转染、稳定转染，以及DNA和siRNA或miRNA mimics 或inhibitors的共转染。它的规格有三种：0.1ml、1ml和4×1ml，每次用量约为1.5ul（24孔板）。1 ml的价格为3250元。

至于PolyFect、Effectene、SuperFect和TransMessenger，之前的专题已经详细介绍过，请大家看这里（http://www.ebiotrade.com/newsf/2005-8/200589173645.htm），只是里面的价格不再适用。大家可以登陆QIAGEN网站查询现在的价格。

Qiagen还推出了转染步骤数据库。你可以通过这个数据库找到最适合你的细胞系和培养板/皿大小的转染试剂和专门步骤。点击http://www.qiagen.com/transfectionprotocols/default.aspx，选择细胞系、核酸类型（DNA、mRNA、miRNA或siRNA）、培养形式（6孔板或其他），就会弹出Qiagen推荐的转染试剂，和专门的转染步骤，你可以下载或打印，非常方便。这样可省事多了，能节约不少优化的时间，还能节约样品和试剂。（生物通 余亮）