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《蛋白质印迹手册》第六版上线

【字体: www.ebiotrade.com 时间:2014年5月16日 来源:默克密理博

摘要:

  默克密理博公司备受欢迎的《蛋白质印迹手册》(Protein Blotting Handbook)又出新版啦。第六版的手册在优化抗体浓度和降低背景方面增加了更全面的指引,同时扩展了荧光检测的数据和操作步骤,是蛋白质印迹实验不可缺少的好伙伴。即日起,生物通将每天发布《蛋白质印迹手册》的内容,以飨读者。同时,欢迎大家索取印刷版的《蛋白质印迹手册》。

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自1979年推出以来(Towbin等,1979)蛋白质印迹已成为研究实验室的一种常规工具。它通常用于检测复杂样品中的少量蛋白质,或监控蛋白质表达与纯化。最简单的蛋白质印迹操作,被称为斑点印迹或狭缝印迹,利用真空抽滤将蛋白质转移到一块微孔膜上。尽管这种方法可提供蛋白整体表达水平的定量信息,并可以平行开展多个样品的检测,但它缺乏蛋白分子量的信息。同时,特异性也会受损,因为蛋白质降解产物或翻译后修饰的异构体也能随着完整蛋白一起被检测。

Western印迹是一种更为复杂的操作,它包含通过凝胶电泳来分离蛋白质复合物,随后电转移到适当的膜(如PVDF)上。在蛋白质转移至PVDF膜后,它们可被染色,以便观察,也可直接通过N端测序、质谱分析或免疫检测来鉴定。免疫检测包含通过蛋白质与特异抗体的反应来鉴定这种蛋白质。通过空间分辨,这种方法能够提供各个蛋白的分子量信息,并能区分异构体、选择性加工产物及其他的翻译后修饰形式。

在临床实验室,免疫印迹已在传染病和自身免疫性疾病、过敏及其他领域被证明是有用的(Towbin等,1989;Stahl等,2000)。Western印迹被公认是在病毒感染过程中,继重复反应ELISA之后的一种可靠的确诊的临床检测,也是一种灵敏、明确而简单的分析,可提供高度复杂的信息(Bauer,2001;Mylonakis等,2000;Heermann等,1988)。

Western印迹的应用实例包括通过定量Western分析来分析酵母中的蛋白质表达(Ghaemmadami等,2003),蛋白质拷贝数和区室化(compartmentalization)的鉴别(Rudolph等,1999),ATP竞争性蛋白激酶抑制的研究(Wang和Thompson,2001),以及作物和食品中转基因生物的检测(Ahmed,2002)。

无疑,蛋白质印迹一直是探索性研究的理想平台,也依然是评估新抗体及其他蛋白检测分析(如ELISA、基于磁珠的分析、流式细胞分析和免疫组化)的标准。然而,同时分析更多蛋白质以鉴定复杂的蛋白质互作网络的需求,以及保留珍贵样品的相关需求,一直在推动研究不断改进印迹技术的灵敏度和速度。一种“双印迹(double blotting)”方法(Lasne,2001,2003)可消除由于印迹蛋白与无关二抗之间强的非特异性相互作用造成的假阳性。Far-Western印迹技术可实现蛋白质间特异相互作用的检测(Grasser,1993),而Southwestern印迹被用于鉴定与特定DNA序列相互作用的蛋白质(Silva,1987)。Multistrip Western印迹被证明能提高通量,同时最大限度减少印迹间的可变性(Aksamitiene,2007)。新一代印迹技术的特点是产生信号所需的蛋白量减少(Swank,2006),以及改善Western印迹的定量能力(Schilling,2005a;2005b)的各种方法。

更好的膜,更好的印迹。

近四十年来,默克密理博一直是转印膜的领先供应商。1975年,E.M. Southern使用这些膜首次开发出从琼脂糖凝胶上转移核酸1。第一款用于Western印迹的0.45 μm PVDF基质,Immobilon®-P膜,在1985年推出,而第一款用于蛋白质印迹和测序的0.2 μm PVDF基质,Immobilon®-PSQ膜,在1988年推出。

除了Immobilon® 膜和试剂,默克密理博还为蛋白质研究提供了广泛的其他工具,包括温和的蛋白质提取试剂盒,通过PureProteome™磁珠快速分离蛋白质,以及通过Amicon® Ultra离心过滤器高效浓缩。

从何处获得更多信息

如果您有问题或需要协助,请联系默克密理博的技术服务专家,或在线提出您的问题,地址在:www.emdmillipore.com/techservice

您还可以找到关于Western印迹及其他相关方法的常见问题(FAQ)的答案,地址在:www.emdmillipore.com/wb_faqs

立即索取印刷版《蛋白质印迹手册》

关于第六版

随着蛋白质印迹手册第六版的出版,默克密理博公司一如既往地协助研究人员紧跟蛋白质检测的前沿进展。我们在优化抗体浓度和降低背景方面增加了更全面的指引,同时扩展了荧光检测的数据和操作步骤。

这本手册代表了我们应用科学家的集体经验和智慧——正是他们一直积极参与推进蛋白质印迹和检测技术。这本手册也包含了我们技术服务专家所提供的许多最常见的建议,世界各地的科学家常常联系他们寻求帮助。

(实际内容以《蛋白质印迹手册》印刷版为准,如有错漏,敬请谅解)

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