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蛋白质印迹手册16:狭缝印迹操作详解[创新技巧]

【字体: www.ebiotrade.com 时间:2014年8月1日 来源:默克密理博

摘要:

  下列操作介绍了将蛋白质过滤到Immobilon® PVDF转印膜的标准步骤。关于更多信息,请查看您的转印系统附带的操作指南。

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下列操作介绍了将蛋白质过滤到Immobilon® PVDF转印膜的标准步骤。关于更多信息,请查看您的转印系统附带的操作指南。

提示:去污剂可能抑制蛋白质与Immobilon® PVDF转印膜的结合。

建议 – 粘稠的样品必须用缓冲液稀释,以降低粘稠度。

必需的设备和溶液
• 两张Immobilon® PVDF转印膜,切成转印装置的大小。
• 滤纸,切成转印装置的大小。
• 甲醇,100%
• Milli-Q® 水
• 缓冲液,用于上样和清洗。
• 转印装置,斑点印迹或狭缝印迹形式。

准备
1. 准备膜。
a. 将膜在甲醇中浸泡15秒。膜应均匀地从不透明变成半透明。
b. 小心将膜放入Milli-Q® 水中,浸泡2分钟。
c. 小心将膜放入缓冲液中,至少平衡5分钟。
2. 将样品溶解在缓冲液中。如果样品溶液混浊,离心以去除颗粒。如果样品粘稠,用更多缓冲液稀释。

转印装置的组装
关于详细的组装说明,请参看制造商的操作指南。
1. 将一张湿润的滤纸放在装置上。一些装置可能需要多张。
2. 将两张膜放在滤纸上面*。
3. 盖上装置。
4. 连接真空管。

蛋白质转印
1. 短暂施加真空,以去除多余的缓冲液。
2. 关闭真空,小心将样品加入孔中。
3. 在转印装置上施加真空。
4. 当所有样品滤过膜时,关闭真空。
5. 在每孔中加入缓冲液,以清洗周围。施加真空,让清洗缓冲液滤过。
6. 当所有清洗缓冲液滤过膜时,关闭真空。
7. 若要取出印迹,打开印迹装置。
8. 用镊子小心取出转印膜。

立即索取印刷版《蛋白质印迹手册》

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