蛋白质印迹手册24:印迹失败的例子和原因

【字体: 时间:2014年09月15日 来源:默克密理博

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  下面是一些印迹失败的例子和原因,也许能帮助您获得更好的结果。

不充分的清洗和/或未过滤的封闭液导致背景有污点。使用0.2 μm Millex®-GP 针头式过滤器来过滤封闭液,并增加清洗次数,可改善。

指纹    划痕和镊子痕迹    膜被折叠

转移过程中膜和SDS-PAGE凝胶之间引入气泡。

胶片上的负像(倒转图像)由过量的HRP结合二抗引起。将二抗稀释度提高10倍可改善检测。印迹左侧是与1:5,000稀释的二抗孵育,右侧是与1:50,000稀释的二抗孵育。

高背景和暗边缘由印迹清洗不充分引起。增加或延长清洗,或使用高盐清洗可缓解。

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