CRISPR重要成果：抗体制备将迎来变革

哈佛医学院的研究团队将CRISPR-Cas9用到了新的地方。他们利用这一系统成功编辑了小鼠和人类的免疫球蛋白基因。这一技术不仅有助于正常和淋巴瘤B细胞的生物学研究，还可能为抗体生产领域带来一场革命。

　　

生物通报道：CRISPR-Cas9原本是细菌在漫长的进化史中演化出的重要防御机制。规律成簇的间隔短回文重复CRISPR与内切酶Cas9的组合，可以在引导RNA的指引下，靶标并切割入侵者的遗传物质。 2012年研究者们利用这一特点，将CRISPR系统发展成了强大的基因组编辑工具。现在CRISPR-Cas9基因组编辑系统的应用延伸到了基因敲除、删除、染色体重排、RNA编辑、全基因组筛选等众多领域。

日前，哈佛医学院的研究团队将CRISPR-Cas9用到了新的地方。他们利用这一系统成功编辑了小鼠和人类的免疫球蛋白基因。这项研究发表在三月九日的Nature Communications杂志上。

免疫球蛋白的类别转换重组(CSR)发生在淋巴滤泡的生发中心。成熟B细胞在活化之后可以通过这种机制生产不同类型的抗体。研究人员把Cas9和引导RNA（gRNA）包装在逆转录病毒或慢病毒中，将其送入IgM+小鼠B细胞和杂交瘤，促使IgH（免疫球蛋白重链）发生类别转换重组。这种方法也可以在人类B细胞系中诱导CSR，实现特定IgH亚类的定向生成。除此之外，研究人员还通过CRISPR-Cas9改造了小鼠杂交瘤，使其分泌Fab片段而不是完整Ig。

这项研究表明，对小鼠和人类细胞的Ig基因进行编辑，可以获得人们想要的IgH转换。这一技术不仅有助于正常和淋巴瘤B细胞的生物学研究，还可能为抗体生产领域带来一场革命。

单克隆抗体一直是基础研究、医学诊断和疾病治疗中的重要工具。制备单克隆抗体的传统方法，是诺贝尔奖获得者Georges Köhler和César Milstein在上世纪七十年代开发出来的。为了加快抗体研发的速度，The Scientist杂志联系了相关领域的一些专家，请他们分享了自己使用新兴技术进行抗体鉴定和分离的经验。（更多详细信息参见：专家经验谈：抗体制备法的利与弊）

几乎所有实验室都会用到抗体，抗体不仅是生命科学研究的重要工具，在免疫学诊断领域也是不可或缺的。做过免疫荧光、免疫沉淀（IP）或者Western blot实验的人都知道，抗体优劣对实验结果有很大的影响。然而市面上的抗体种类繁多同时也良莠不齐，由于缺乏评估抗体质量的标准方法，人们过去只能依赖于生产厂家的信用。为此，科学家们建立了一个评估抗体质量的通用标准。（更多详细信息参见：Nature Methods：抗体质量的金标）

抗体毁了你的western blot实验？亲，你并不是孤单的一个人。有时，你会发现新一批次的抗体无法再现之前的结果。有时，你甚至发现抗体根本不能与目标蛋白结合。钱花了不说，时间也一去不复返。如何选择适当的WB抗体，让Bio-Rad的专家来教你几招。（更多详细信息参见：Western blot抗体选购有讲究）

生物通编辑：叶予

生物通推荐原文：Editing of mouse and human immunoglobulin genes by CRISPR-Cas9 system