PCR酶新品巡礼之NEB：乱花渐欲迷人眼[选购宝典]

DNA聚合酶是每个实验室的常备品，PCR实验可少不了它。尽管PCR总体上仍遵循着经典的三步法，但PCR中的多个环节都有改进，包括PCR仪、PCR酶、缓冲液等等。这几年也涌现出不少新的PCR酶，要么适应更广泛的模板，要么扩增更长的片段，甚至索性跳过核酸纯化，直接从样本中扩增。生物通小编这就带您去瞧瞧……

这一回我们来瞧瞧NEB公司这几年推出了哪些PCR酶新品吧。NEB真不愧为老牌的酶类产品供应商，各种各样的酶，那可不是一般的多。登陆它的网站，光是聚合酶，就有整整一大页，常规PCR、快速PCR、长距离PCR、高保真PCR、多重PCR，每个子目录下都有一长串产品。幸亏小编找到了PCR聚合酶选择表，上面清楚地列出了保真度、片段长度、延伸速率、外切酶活性等各项参数，否则三天三夜也搞不清楚。

比你想象的更长
大家也许还对去年生物通首页上的长颈鹿广告记忆犹新吧，一只可爱的长颈鹿高耸云端，“比您想象的更长”，这就是NEB的LongAmp™ DNA聚合酶。LongAmp™ DNA聚合酶是一种新型混合酶，混合有 NEB高品质 Taq和广受欢迎的高保真聚合酶 Deep Vent，因而既具有 Taq酶的高扩增能力，也具有 Deep Vent的高保真性，是扩增长片段 DNA的首选酶。

至于到底有多长，lambda DNA可扩增至40 kb，基因组DNA可扩增至30 kb。因为含有高保真聚合酶Deep Vent，所以保真度是 Taq酶的2倍。延伸速率也比普通的Taq酶略高，达1.2 kb/min。提醒一下，由于是混合酶，PCR产物则部分是带A尾巴的，部分是平末端的。如果下一步要转到TA克隆，有必要进行加A操作。

无可挑剔的Phusion II代
Phusion® II热启动超保真 DNA 聚合酶是去年底才推出的新品，由Finnzymes公司开发和生产，NEB来销售。它秉承了Phusion系列DNA聚合酶的超保真度，错配率比 Taq 低 50 倍，比 Pfu 低 6 倍，是目前市场上保真度最高的热稳定聚合酶之一。而且它合成 DNA 的速度是以往任何单一酶都难以实现的，即使是最复杂的模板，也能准确、快速地完成反应。每 kb 碱基的延伸时间低至 15-30 秒。

在常温下，Phusion® II热启动超保真 DNA 聚合酶与一种Affibody®分子可逆结合，因而失活。PCR循环开始后，酶立刻重新激活。升级版的II代Phusion® 热启动超保真 DNA 聚合酶所使用的Affibody分子对退火步骤的温度没有限制，因此允许使用的引物更宽了，包括那些熔解温度低的引物。这种酶还对PCR抑制剂有着高耐受性，让您所需的优化极少。

超保真+速度快+热启动+20 kb的扩增子长度，真是一种无可挑剔的DNA聚合酶。无论您的要求多么苛刻，相信它都能满足。

快，快，快！
近年来，PCR的一个趋势就是快，不求最快，只求更快。无论是仪器还是酶，都在朝这方面努力。仪器的升降温更快了，酶的延伸速率更高了。此外，研究人员还另辟蹊径，尽量去除不必要的步骤，譬如不提取DNA，而是直接从细胞或组织中扩增目的片段。这样不仅能节省时间和试剂，还能最大程度地避免污染。然而，从血液或组织中直接扩增DNA也是颇具挑战性的，因为样品中存在抑制剂。NEB也顺应潮流，开发出几种具有此功能的聚合酶和试剂盒。

Hemo KlenTaq™ 就是其中的一例。从名字可以大致猜出，它适用的样品是血液。Hemo KlenTaq是截短后的Taq DNA 聚合酶，它缺失了 N 端的 280 个氨基酸。Hemo KlenTaq还具有其它突变，这些突变使它能够耐受全血中存在的抑制剂。因此，它能够耐受高达10%的全血。无需事先提纯，Hemo KlenTaq也能够扩增人和小鼠全血样品中的 DNA。在大多数抗凝剂存在的情况下依然表现良好，包括肝素、柠檬酸和 EDTA。

同时，Phusion™ 血源 PCR 试剂盒也是为全血中 DNA的扩增而设计的。它在 PCR 前无需纯化 DNA。试剂盒中含有经过改造的 Phusion 热启动超保真 DNA 聚合酶，适合保真度要求高的实验。此酶掺入率高，聚合能力强，能够耐受血液中存在的抑制剂，甚至当血液浓度高达 40% 时依然保持活性。Phusion 血源 PCR 试剂盒能够对含有不同抗凝剂、贮存于不同条件下以及不同来源的血液样品进行分析，它还能够分析滤纸上的血液样品。

以上介绍了NEB的一些新品，它的PCR聚合酶远不止以上几种。点击http://www.neb.com/nebecomm/tech_reference/polymerases/nebpcrproducts.asp，可查看PCR聚合酶选择指南。如果您仍是一筹莫展，请点击此处留言，NEB的技术人员会与您联系。（生物通 余亮）

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