Western Blot技术指南—转印篇

蛋白质印迹技术（免疫印迹实验）又称为Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。Western Blot主要用于检测或分析蛋白，应用领域集中在基因表达研究、抗体活性检测和疾病诊断等。

上期小编为大家介绍了Western Blot—蛋白电泳；今天小编为大家介绍Western Blot—蛋白转印。

转印原理

转印是利用电场将电泳后凝胶中的蛋白质 、核酸等转移至固相支持物NC膜或PVDF膜上，形成印迹。

转印在Western Blot实验中至关重要，直接决定了实验成败。

固相膜的选择

PVDF膜

PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜，是蛋白质印迹法中常用的一种固相支持物。PVDF膜是疏水性的，膜孔径有大有小，随着膜孔径的不断减小，膜对低分子量的蛋白结合就越牢固。大于20kda的蛋白选用0.45um的膜，小于20kda的蛋白选用0.2um的膜，使用时需要先用甲醇活化电极。PVDF膜在机械强度和化学相容性上都具有更优越的性能，且灵敏度高、分辨率和蛋白亲和力较其他的膜要高，非常适合分子量较小的蛋白质检测。

NC膜

NC膜即硝酸纤维素膜，可结合蛋白质和核酸进行各种印迹应用。可适用于蛋白质印迹法、RNA印迹法、DNA印迹法和斑点杂交技术。NC膜背景低，但对于分子量较小的蛋白质会在洗涤时丢失，且NC膜韧性较差，操作时容易碎，对操作的技巧要求较高。

转印方式的选择

湿转

蛋白从胶到膜上的湿转是指滤纸-胶-膜-滤纸的三明治结构全部沉浸在缓冲液里。此种方法可以灵活设置转印时间和转印电压，转印的分子量范围广，转印效率高，需要冷却系统降温。

半干转

蛋白从胶到膜上的半干转膜是指滤纸-胶-膜-滤纸的三明治结构吸满缓冲液，再放到另外的干燥的阳极和阴极板之间。转印时间较短，无需专门的冷却系统，适合30-120KD蛋白。

干转

干转是指系统中不需要加入缓冲液，这是由于阳极和阴极板系统含有缓冲液体系。适合小分子量蛋白转印。

转印推荐

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