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  • 利用NanoMEDIC蛋白-RNA复合物转导系统介导的SpCas9靶向基因剔除技术研究

    研究亮点本研究采用数值模拟方法探究双股圆形冲击射流在可侵蚀沙床上诱导的流动结构与冲刷特性,通过将模拟的泥沙侵蚀沉积数据与已发表实验数据对比验证了模拟可靠性。分析表明射流组合程度在决定流体动力学和冲刷坑形态方面起关键作用。湍流方程本研究采用Flow-3D(计算流体动力学)框架研究固定/移动射流引起的侵蚀现象,该框架使用有限差分法(FDM)求解完全三维瞬态Navier-Stokes方程。Flow-3D中实施了分数面积体积障碍物表示(FAVOR)方法。本文模拟的淹没射流冲刷导致充分发展的泥沙输运运动和水体湍流流动。当射流冲击沉积物时,流体与沉积物发生碰撞,实验设置为表征垂直冲击射流诱导的冲刷坑响应,

    来源:OpenNano

    时间:2025-09-23

  • STING介导的抗病毒反应:揭示MVA在禽类细胞中复制调控机制及其对痘苗病毒疫苗生产的启示

    STING knockout cell line generation and characterization为探究cGAS-STING信号通路在MVA感染中的调控作用,研究团队通过CRISPR-Cas9基因编辑技术构建了鸡STING基因敲除细胞系(DSK)。针对STING基因第三外显子设计的两条向导RNA(gRNAs)被克隆至PX458载体,该载体同时表达Cas9蛋白与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标签。经共转染与有限稀释筛选,获得携带杂合突变(等位基因1:单碱基缺失;等位基因2:107 bp缺失)的DSK克隆。测序证实突变导致STING蛋白功能结构域(包括丝氨酸366位点及内质网转膜结构

    来源:Microbiology Spectrum

    时间:2025-09-23

  • 棉铃虫几丁质合成酶基因敲除赋予对Bt毒素Vip3Aa的抗性研究

    通过CRISPR/Cas9基因编辑技术对棉铃虫(Helicoverpa zea)的几丁质合成酶基因(chitin synthase 2, CHS2)进行定向敲除,研究人员成功构建了CHS2-KO品系。该品系对Bt毒素Vip3Aa表现出高达29,000倍的抗性,且抗性为常染色体隐性遗传,未对Cry1Ac或Cry2Ab毒素产生交叉抗性。结果表明,CHS2在Vip3Aa中毒过程中发挥关键作用,这一发现为解析田间害虫对Vip3Aa的抗性演化机制提供了分子基础,并对Bt作物抗性治理策略具有重要启示意义。研究由美国农业部农业研究局(USDA ARS)、亚利桑那大学和田纳西大学合作完成,资助来自USDA农业

    来源:Pest Management Science

    时间:2025-09-23

  • 基于粘性末端驱动无PAM限制的RPA-CRISPR/Cas12a双重放大系统实现KRAS G12C超灵敏检测

    研究人员构建了一种新型荧光生物传感平台,通过CRISPR/Cas12a与重组酶聚合酶扩增(RPA)协同作用,实现了无需原型间隔序列邻近基序(PAM)的KRAS G12C单碱基突变超灵敏检测。该技术利用HindIII酶切特性将目标基因序列切割成含粘性末端的双链DNA(dsDNA),这些特殊末端能高效激活Cas12a的反式切割(trans-cleavage)活性,从而产生强烈荧光信号。该策略在10 aM(阿摩尔)至10 pM(皮摩尔)范围内呈现优异线性关系,检测限低至1.5 aM。更令人瞩目的是,在总基因浓度为10 pM的背景下,该方法可精准区分低至0.1%的KRAS G12C突变,并在实际样本检

    来源:Chemical Communications

    时间:2025-09-23

  • 鉴定未表征蛋白作为十二指肠贾第鞭毛虫中贾第鞭毛虫病毒(GLV)感染的新型调控因子

    ABSTRACT十二指肠贾第鞭毛虫(G. duodenalis)是一种常见的肠道原生动物寄生虫,是儿童和旅行者腹泻的主要病原体。虽然许多感染无症状,但可能导致儿童严重的营养不良和认知发育障碍。贾第鞭毛虫病毒(GLV)是一种特异性感染G. duodenalis的原生动物病毒,其特征为无分段、无包膜的双链RNA结构,并包含RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)和衣壳蛋白(GLVCP)等必需蛋白。尽管RdRp与宿主蛋白的相互作用已被广泛研究,但GLVCP的功能仍 largely unexplored。本研究采用多种方法,包括质谱、共免疫沉淀(Co-IP)和双分子荧光互补(BiFC),来鉴定和表征GLV

    来源:Journal of Virology

    时间:2025-09-22

  • 基于超分子化学介导Cas12a催化聚集的假体关节感染诊断新策略

    Reagents and chemicals本研究使用的所有DNA寡核苷酸均由上海生工生物科技有限公司定制合成并经HPLC纯化,序列详见表S1。EnGen® LbaCas12a (Cpf1) 酶(产品编号 M0653T)购自北京NEB公司。其他试剂包括二甲基亚砜(DMSO)、40%乙二醛溶液、乙二胺四乙酸(EDTA)、1-氮杂金刚烷(AA)和氯化汞(HgCl2)均购自标准供应商。Synthesis and characterization of CCA probeCCA探针通过多步合成路线高效制备,包括:(1)通过铜(I)介导的点击化学反应将1-氮杂金刚烷(AA)与炔基修饰的DNA连接;(2)

    来源:Biosensors and Bioelectronics

    时间:2025-09-22

  • 眼色素依赖的光感知调控草地贪夜蛾昼夜节律行为同步的机制研究

    Section snippetsInsect culture草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)幼虫在人工饲料(Pinto et al., 2019)上饲养,实验室条件为温度26±1°C、相对湿度55±5%、光暗周期14:10小时(光照:黑暗)。孵化后的幼虫初期群养,至三龄后分装单独饲养。蛹期按性别分笼羽化,成虫饲喂10%蜂蜜水。Knockout of cinnabar and cardinal induced a colorless eye phenotypecinnabar基因组序列(LOC118267147)全长11861 bp,其编码区(CDS)为1338 bp,包

    来源:Journal of Insect Physiology

    时间:2025-09-22

  • 综述:资源有限环境下地中海贫血症的先进分子方法及分子水平诊断检测选择

    分子层面解析地中海贫血症地中海贫血是一种单基因遗传性血红蛋白病,以隐性遗传模式影响全球儿童与成人。β-地中海贫血在印度占全球疾病负担的25%,高发于地中海地区、中东和南亚,其中印度北部和西部州邦发病率最高。患者需终身输血和螯合治疗,面临心脏病、肝损伤及内分泌疾病等并发症。临床分型包括重型(TM)、中间型(TI)和轻型,分子层面则分为α-地中海贫血(HBA1/HBA2基因)和β-地中海贫血(HBB基因),分别由碱基缺失和点突变导致。分子诊断技术全景传统实验室检测包括血常规、血红蛋白电泳和色谱分析,但分子技术才是确诊关键。桑格测序可检测所有突变但无法识别大片段缺失;等位基因特异性PCR适用于遗传同

    来源:Hematology, Transfusion and Cell Therapy

    时间:2025-09-22

  • 增强C/EBPα功能通过保守的uORF调控机制延长非洲青鳉鱼健康寿命与寿命

    1 引言非洲青鳉鱼(Nothobranchius furzeri)因其短暂的生命周期成为衰老研究的重要模型。这种脊椎动物在自然栖息地中为适应季节性水域而进化出快速生命周期,在圈养环境中表现出明显的衰老特征,包括认知功能下降、组织完整性退化、癌症发病率增加和基因表达谱改变。其基因组已完全测序,并建立了CRISPR/Cas9基因编辑工具。CCAAT/增强子结合蛋白(C/EBP)家族包含六个成员(α至ζ),广泛参与细胞增殖、分化、代谢和衰老过程。C/EBPα和C/EBPβ的蛋白表达在mRNA翻译水平受到独特调控,涉及顺式调节上游开放阅读框(uORF)和从单个mRNA分子翻译产生三种不同长度的蛋白异构

    来源:Aging Cell

    时间:2025-09-21

  • 水稻E2泛素结合酶家族系统分析揭示七个调控种子萌发的关键基因及其在ABA通路中的作用机制

    在水稻生产过程中,种子萌发是栽培起点和幼苗生长的基础,直接影响粮食产量和质量。然而种子萌发受到激素和环境因子的精密调控,其中脱落酸(ABA)和赤霉素(GA)的平衡尤为关键。高温多雨条件下易发生的穗发芽(Pre-harvest sprouting, PHS)现象,会导致稻谷品质下降和产量损失,给农业生产带来重大经济损失。虽然已知泛素化修饰在植物激素稳态调控中发挥重要作用,但水稻E2泛素结合酶(UBC)家族中除OsUBC12外,多数成员在种子萌发中的功能尚未明确。为系统解析UBC家族基因在水稻种子萌发中的作用,研究人员采用CRISPR-Cas9基因编辑技术对23个OsUBC基因进行敲除,并构建了2

    来源:The Crop Journal

    时间:2025-09-21

  • 综述:通过性别重编程实现蚊媒控制:白纹伊蚊雄性相关转基因

    引言全球正面临白纹伊蚊(Aedes albopictus)等病媒昆虫扩散的严峻挑战。这种被称为"亚洲虎蚊"的入侵物种通过全球贸易路线和气候变暖,已广泛分布于热带和温带地区。与埃及伊蚊(Aedes aegypti)相似,白纹伊蚊能够传播基孔肯雅热、登革热、寨卡和黄热病等虫媒病毒,以及犬心丝虫(Dirofilaria immitis)等寄生虫。其快速的分布区扩张、嗜人血特性、对病毒的易感性和白天 aggressive 的叮咬活动,使其成为导致登革热爆发和基孔肯雅热流行的强有力病媒。传统化学防治方法受到杀虫剂抗性等位基因快速传播的限制,加之对农药使用的严格监管,迫切需要更有效且环境友好的替代方案。遗

    来源:Current Opinion in Insect Science

    时间:2025-09-21

  • CRISPR/Cas9联合λ-Red重组系统诱导杀鱼爱德华氏菌转座子IS1的异常转座及其机制研究

    Highlight细菌菌株杀鱼爱德华氏菌NH1分离自濒死牙鲆,在含1.5%氯化钠的胰蛋白酶大豆肉汤(TSB)中27°C培养。为培养丙氨酸消旋酶基因敲除菌株(E. piscicida Δalr325 NH1 和 E. piscicida Δalr50 NH1),需在培养基中添加终浓度100μg/ml的D-丙氨酸。通过CRISPR/Cas9技术构建溶血素(ethA)基因敲除株为构建ethA基因敲除载体,设计了靶向ethA基因的sgRNA(向导RNA)。通过重叠延伸PCR合成同源臂,并与经BsaI酶切的pCas质粒连接。最终构建的pCas-sgRNA-ethA质粒通过电转化导入表达λ-Red重组系统

    来源:Research in Microbiology

    时间:2025-09-21

  • 蔗糖-赤霉素互作调控水稻(Oryza sativa L.)叶片伸长的分子机制研究

    Section snippetsINTRODUCTION水稻叶片光合能力显著影响生物量和产量。作为光合作用的关键器官,解析叶片形态建成的调控机制对提升作物源-库效率至关重要。水稻叶片发育是多维生物过程,包括叶原基形成、极性建立维持和叶片扩展(Wang等,2021a)。叶片长度是由多基因控制的复杂性状...Plant materials and growth conditions实验采用粳稻品种日本晴的野生型(WT)和ossut突变体,包括单突变系ossut3-23-1和ossut5-8(Wu,2022),以及双突变系ossut3;5-1和ossut3;5-2。为构建ossut3;5双敲除突变体

    来源:Plant Science

    时间:2025-09-21

  • 综述:基于适配体的PSA生物传感技术:从纳米材料到CRISPR诊断技术

    基于适配体的PSA生物传感技术:从纳米材料到CRISPR诊断技术引言近年来,可持续材料开发与环境污染控制的需求推动了生物传感技术的革新。适配体(Aptamer)作为一种通过体外筛选技术获得的单链DNA或RNA分子,因其高亲和力、易修饰性和稳定性,成为前列腺特异性抗原(PSA)检测的核心识别元件。结合纳米材料与CRISPR(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)基因编辑技术,生物传感平台在灵敏度、选择性和便携性方面实现了突破性进展。导电墨水的可持续创新本研究开发了一种以木薯淀粉(Tapioca Flour, TP)和山

    来源:Talanta

    时间:2025-09-21

  • 基于壳聚糖气凝胶-水凝胶复合膜的诺如病毒高效现场检测预处理装置研发与应用

    Reagents and instruments所有核苷酸链由生工生物工程(上海)股份有限公司合成(序列详见表S1)。RPA反应使用的TwistAmp Basic试剂盒购自英国TwistDx公司;病毒RNA/DNA提取试剂盒(MiniBEST系列)和逆转录试剂(PrimeScript RT with gDNA Eraser)来自北京Takara公司;RNase抑制剂(人胎盘来源)、M-MuLV逆转录酶及Lba Cas12a (Cpf1)蛋白均采购自New England Biolabs公司。Assembly of pretreatment enrichment devices本研究设计的TSM

    来源:Talanta

    时间:2025-09-21

  • 利用CRISPR/Cas9系统敲除mstnb基因培育速生型草鱼

    作为世界上养殖产量最高的淡水鱼类,草鱼在中国水产养殖业中占据举足轻重的地位。2023年全球草鱼产量达到587万吨,其中中国是主要生产国。然而,传统的育种方法已接近其极限,难以进一步显著提升草鱼的生长性能。草鱼性成熟周期长达5年,通过传统育种方法培育新品种需要15-20年时间,这严重制约了遗传改良的进程。肌肉生长抑制素(myostatin,mstn)是转化生长因子β(TGF-β)超家族成员,在脊椎动物中作为骨骼肌发育和生长的负调控因子发挥着关键作用。该基因通过抑制生肌通路关键基因myod1的转录来限制肌肉生长。在哺乳动物中,mstn基因敲除可导致著名的"双肌"表型,肌肉质量增加2-3倍。近年来,

    来源:Reproduction and Breeding

    时间:2025-09-21

  • 综述:基于CRISPR/Cas的RNA检测技术进展

    Classification of CRISPR/Cas systemsCRISPR/Cas系统根据效应蛋白复合物的组成被分为两大类:Class I系统使用多蛋白效应复合物(包括I型、III型和IV型),Class II系统使用单蛋白效应复合物(包括II型、V型和VI型)。各亚型具有不同的操纵子结构和功能,为RNA检测提供了多样化的分子工具。Mechanism of CRISPR/Cas-based nucleotide detectionClass II系统(特别是VI型)的Cas蛋白(如Cas13)在RNA检测中展现出独特优势。这些蛋白与向导RNA(gRNA)结合后形成复合物,在识别靶RN

    来源:Microchemical Journal

    时间:2025-09-21

  • 单链DNA供体修复模板结合CRISPR/Cas9实现马铃薯高频靶向插入:结构优化与修复机制解析

    1 引言马铃薯(Solanum tuberosum L.)作为全球重要粮食作物,面临气候变化带来的生物与非生物胁迫挑战。传统育种受限于其四倍体遗传特性、高杂合度和近交衰退。CRISPR/Cas9系统通过向导RNA(sgRNA)介导的Cas9核酸酶在特定位点产生双链断裂(DSB),为作物遗传改良提供了精准工具。DSB主要通过易错的非同源末端连接(NHEJ)修复,导致小片段插入或缺失(indels);若存在微同源区域,则触发微同源介导末端连接(MMEJ),产生更大缺失。然而,许多农艺性状需要精确的编码区或调控区修饰,而非简单基因敲除。当存在供体修复模板(DRT)时,可激活同源定向修复(HDR)途径

    来源:Frontiers in Genome Editing

    时间:2025-09-20

  • 巨噬细胞分化新机制:PSTPIP1与Pyrin在自身炎症性疾病中的关键作用

    在免疫系统的精密调控网络中,单核细胞与巨噬细胞作为先天免疫的重要防线,其分化过程一直备受关注。这些细胞由造血干细胞发育而来,迁移至组织后分化为具有特定炎症功能的巨噬细胞。然而,前体细胞向巨噬细胞分化过程中炎症功能的发育机制尚未完全阐明,这成为免疫学领域的一个重要科学问题。尤其值得注意的是,细胞骨架相关衔接蛋白PSTPIP1(proline-serine-threonine phosphatase interacting protein 1)和Pyrin炎症小体的突变会导致家族性地中海热(FMF)和化脓性关节炎、坏疽性脓皮症和痤疮综合征(PAPA)等自身炎症性疾病,但传统观点将这些疾病的发病机制

    来源:European Journal of Cell Biology

    时间:2025-09-20

  • 靶向PSPC1增强鼻咽癌放射敏感性并抑制上皮间质转化与转移的机制研究

    亮点解析细胞系与培养人鼻咽癌细胞系CNE2由福建省肿瘤医院放射生物学与肿瘤学实验室培养。放射性抵抗细胞系R743通过既往报道方法[24]从原始CNE2细胞中衍生,同样培养于福建省肿瘤医院放射生物学与肿瘤学实验室。细胞采用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基(Gibco盖瑟斯堡MD),在37℃、5% CO2的湿润培养箱中培养。PSPC1敲除R743与过表达CNE2细胞系的构建PSPC1参与包括基因表达调控和应激反应在内的多种细胞过程。本研究通过RT-qPCR和蛋白质印迹分析检测放射性敏感细胞CNE2与放射性抵抗细胞R743中PSPC1的表达水平。结果显示,与放射性抵抗的R743细胞相比,放

    来源:Experimental Cell Research

    时间:2025-09-20


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