Merck-Millipore
生物通
 
2012身边的表观明星
生物通首页 > 今日动态 > 专题总汇 > 数字PCR:精彩应用、魅力无限


       数字PCR(dPCR)是PCR领域的新浪潮。它的与众不同之处在于样品分液。通过微流体芯片、通道或液滴实现分液,而每个都作为单独的PCR反应,带来了出色的灵敏度。同时,也无需建立标准曲线。数字PCR因其精确性、重复性以及在诊断和制药应用上的潜力而引起了行业的极大关注。据Frost & Sullivan预计,2011-2016年间dPCR仪器市场将以52%的年均复合增长率增长。随着新应用的不断开发,数字PCR正展示出迷人的魅力。


      精彩应用


MolecualrMD开发基于数字PCR系统的肺癌EGFR微创诊断技术
表皮生长因子受体(EGFR)突变是众多肺癌靶向治疗的重要靶点,EGFR突变状态与抑制EGFR活性的TKIs(酪氨酸激酶抑制剂)靶向治疗药物的疗效紧密相关。MolecularMD的研究人员计划开发针对EGFR突变的检测方法,以更好判断EGFR高活性肺癌病人的EGFR突变状态,有望帮助医生监测不同病人对于下一代肿瘤靶向治疗药物的反应。

数字PCR助力定制细胞系的开发
Horizon Discovery是英国一家生物技术公司,它采用同源重组的方法来生产改造的细胞系,应用在科研、药物开发和检测以及转化医学等领域。它们的产品包括根据研究人员的具体要求而定制的细胞系,这些体外疾病模型包含了突变型和野生型等位基因。这些工具的有效性在很大程度上取决于其准确性。利用QX100系统,Horizon Discovery能够对改造细胞系中的突变DNA进行绝对定量,而不是估计,让他们能更好地满足客户的需求。

美科学家使用数字PCR平台确认全球首例HIV感染患儿功能性治愈
来自约翰斯·霍普金斯大学(Johns Hopkins University)的Deborah Persaud博士宣布了一个里程碑式的消息——通过抗逆转录病毒疗法,美国密西西比州一名出生时携带艾滋病毒的婴儿,已经被“功能性治愈”。在这一全球瞩目的医学案例中,微滴式数字PCR平台发挥了重要的作用。

数字PCR助力艾滋病疗法的开发
Sangamo研究的一个主要挑战是测定受试者的HIV DNA水平,从而评估新疗法的效果。尽管实时定量PCR(qPCR)是测定基因表达的高效技术,但不完美的扩增效率和必须建立标准曲线让qPCR无法提供精确度和灵敏度,来检测稀有的目标DNA。数字PCR系统让他们能轻松、准确且重复地测定基因组中的低拷贝事件。

数字PCR实现更精确的GMO分析
根据《PLoS One》上发表的一项最新成果,微滴式数字PCR(ddPCR)能精确定量转基因生物中的转基因拷贝数,且成本比定量PCR(qPCR)更低。目前,qPCR是评估GMO的标准方法,但它并不太适合食品,因其含有分子抑制剂,可能干扰DNA扩增,导致不准确的拷贝数预测。

数字PCR技术精确检测癌症基因组扩增
某些拷贝数变异(如基因组扩增)可能导致特定癌基因的过表达,推动癌症发展。靶定扩增的癌基因有望实现癌症的个性化治疗。然而,检测癌组织中的扩增在技术上颇具挑战性。来自斯坦福大学以及Bio-Rad的研究人员证实,数字PCR系统能够精确测定长期存放的癌组织样本中的癌症基因组扩增。



      各大平台 


QX100微滴式数字PCR系统(Bio-Rad)
QX100微滴式数字PCR系统曾获得2011年度Frost & Sullivan北美新产品创新奖。其独特优势是能够产生非常均一、重复的1纳升液滴。这样的好处是每个样品形成20,000个液滴,而其他系统只能分成760-3,000个部分。分得越多,则意味着分析越准确。

QuantStudio™ 3D数字PCR系统(Life Technologies)
QuantStudio™ 3D数字PCR系统外形小巧,流程简单,适用于需要对目标DNA分子进行绝对定量的实验。仪器的核心是高密度的纳米流体芯片,最多可产生20,000个数据点,满足当今大部分数字PCR应用的需求。

Bio-Mark™ 高通量基因分析系统(Fluidigm)
Fluidigm公司结合微流体技术,生物技术和微电子等技术,于2006年底推出了Bio-Mark™ 高通量基因分析系统。其创新就在于集成液体通路技术:利用集成电路制作工艺(光刻)在硅片或石英玻璃上刻上许多微管和微腔体,通过不同的控制阀门控制溶液在其中的流动来实现生物样品的分液、混合、PCR扩增。

RainDrop数字PCR平台(RainDance Technologies)
对于RainDrop数字PCR来说,基于其专利的RainStorm技术,RainDrop系统能够将50微升PCR反应体系快速、均一地制备成1000万个皮升大小的油包水液滴,确保了真正的单分子扩增。这一新型系统除具有超高检测灵敏度和精确绝对定量能力外,更拥有无与伦比的多重分析能力,可实现10重PCR分析。



      选购宝典 


数字PCR实现绝对定量之梦
数字PCR无疑是PCR领域最激动人心的创新之一,这一技术的诞生让许多人绝对定量的梦想成为现实。在许多领域的研究中数字PCR都是难以取代的宝贵技术,包括检测罕见等位基因、在野生型背景下鉴定突变基因、区别低水平的拷贝数变异、验证二代测序结果和基因表达分析等。

dPCR vs. qPCR 我该如何选择?
数字PCR(dPCR)是PCR领域的新浪潮。然而,我们究竟应不应该追赶这个新浪潮?这在很大程度上取决于你的应用和所需的灵敏度水平。何时应该选择dPCR,让我们听听专家的意见。




版权所有 生物通
Copyright© 2000-2011 eBiotrade.com, All Rights Reserved
联系信箱:info@ebiotrade.com