2012新品回顾:PCR & qPCR系统[新品推荐]

【字体: 时间:2012年12月17日 来源:生物通

编辑推荐:

  在PCR方面,2012年最吸引眼球的当属数字PCR了吧。这一技术频繁出现在各大杂志上,也获奖无数。新的平台不断出现,为古老的PCR领域注入了新的活力。今年有哪些新产品上市,它们又应用在哪些方面,且看本文。

在PCR方面,2012年最吸引眼球的当属数字PCR了吧。这一技术频繁出现在各大杂志上,也获奖无数。新的平台不断出现,为古老的PCR领域注入了新的活力。今年有哪些新产品上市,它们又应用在哪些方面,且看本文。

数字PCR

随着近两年新平台的不断上市,数字PCR这个概念近来有点火。据估计,数字PCR的复合年均增长率将达90%,有望从2011年的1000万美元增长到2016年的2.5亿美元,可有点猛啊。数字PCR的近亲是定量PCR,两者都能够估计起始样品中的核酸量,但它们有一个重要的区别。定量PCR是依靠标准曲线或参照基因来测定核酸量,而dPCR则让你能够直接数出DNA分子的个数,是对起始样品的绝对定量。

数字PCR使用与qPCR相同的引物和探针,但具有更高的灵敏度和准确性。通常来说,qPCR无法分辨2倍以下的基因表达差异或拷贝数变异,鉴定频率低于1%的等位基因也很困难。相比之下,dPCR能测定30%或以下的基因表达差异,区分变异体到底是五个拷贝还是六个拷贝,还能鉴定频率在千分之一的等位基因。听上去是不是更强大?

生物通在3月份介绍了市场上三大数字PCR平台,它们分别来自Fluidigm、Life Technologies和Bio-Rad。一个月之后,数字PCR的阵营再次扩大。美国RainDance Technologies公司推出了RainDrop™ 数字PCR系统。基于RainDance专利的RainStorm™ 微液滴(picodroplet)技术,RainDrop系统在每个通道能产生100-1000万个皮升大小的液滴,大大超过其他数字PCR系统。

数字PCR在临床研究中的重要性也凸显。Sangamo BioSciences公司的研究人员就将Bio-Rad的QX100微滴式数字PCR系统应用于HIV功能疗法的开发。在两个独立的低拷贝数分析中,实时定量PCR结果显示差异为十倍,让人难以确定数据究竟是实验差异,还是生物学现实。而有了ddPCR技术,结果显示差异为两倍。“这才是我们真正信赖的数据。”

定量PCR

定量PCR虽不像数字PCR那样新品辈出,引人关注,但也还是有看头的。罗氏的LightCycler®家族又添了新成员—LightCycler® 96实时荧光定量PCR仪。该款仪器继承了LightCycler一贯快速,精准的特性,通过全新研发的192根独立光纤同步检测单元,100%消除边缘效应,在荧光PCR上实现了当前最高的光学均一性;经典的银质反应模块,使得温控效果也一样突出,总体来说是一款性价比非常高的设备。Bio-Rad公司近日也推出新的CFX96 Touch深孔板定量PCR检测系统,使反应体积最高可达125 µl。

SYBR Green法实时定量PCR比探针法成本低,使用也更为方便。不过该方法也存在与生俱来的弊端,SYBR Green法产生的非特异性产物较多,会导致高背景和假阳性。如何优化?请看SYBR法实时定量PCR优化指南

此外,Promega也推出了新型定量PCR试剂GoTaq® qPCR Master Mix。这款试剂采用一种专利的新型双链DNA结合染料(BRYT® Green Dye),能够在进行定量PCR时产生更强的荧光信号,可提高实验数据的准确性和对低表达/低丰度靶标检测的灵敏性。作为升级版的方法,实验时可采用与SYBR® Green I完全相同的设置,无需改变,且与常见的各种Real Time PCR仪器都兼容。

同时,Life Tech也发布了全新一代的SYBR预混液。SYBR® Select Master Mix采用了高度纯化的AmpliTaq® DNA聚合酶,UP (超纯)-利用专利的热启动机制激活,大大提升了特异性。SYBR® Select Master Mix含有SYBR® GreenER™染料,可提供比SYBR® Green I染料更亮的信号且PCR抑制作用更低,可实现高特异性和高灵敏度的DNA、cDNA和RNA定量,达到真正意义上的单拷贝检测。

稀有突变的检测可不是件容易的事,但有了castPCR技术,何惧大海捞针?TaqMan® Mutation Detection Assays是一个高度灵敏且新颖的研究工具,能够检测到隐藏在100万个正常拷贝的背景之下的单个突变分子。这一产品组合涵盖了各种癌基因的重要突变,包括(但不限于):KRAS、BRAF、HRAS、NRAS、EGFR、PIK3CA、KIT、PTEN和TP53。

多重PCR能够在提高通量的同时节省样品降低成本,它需要耗费更多的时间和精力,同时也会给用户回报更丰富的数据。我们介绍了一些实验技巧和商业化工具,帮助您攻克多重PCR之难

试剂

在PCR试剂方面,New England Biolabs(NEB)公司推出了一种性能强劲的DNA聚合酶——Q5超保真DNA聚合酶。它不仅带来了极为出色的保真度,还确保了各种扩增子的可靠扩增,而无论其GC含量如何。这种酶适合SNP检测、基因功能研究等应用,尤其适合新一代测序,因为文库制备时的任何偏向都会带来序列拼接的困难,甚至是序列丢失。

欢迎参加2012生命科学十大创新产品评选,了解更多新产品。

订阅生物通快讯

订阅快讯:

最新文章

限时促销

会展信息

关注订阅号/掌握最新资讯

今日动态 | 人才市场 | 新技术专栏 | 中国科学人 | 云展台 | BioHot | 云讲堂直播 | 会展中心 | 特价专栏 | 技术快讯 | 免费试用

版权所有 生物通

Copyright© eBiotrade.com, All Rights Reserved

联系信箱:

粤ICP备09063491号