miRNA研究导航(二):miRNA的定量

【字体: 时间:2012年03月23日 来源:生物通

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  miRNA在许多生物过程中扮演了重要角色,包括分化和发育、细胞信号通路以及对感染的反应。大量的证据表明,miRNA表达的失调是一些疾病过程(包括许多癌症)的起因或指示剂。miRNA研究的成功依赖于高性能工具和技术的使用。QIAGEN是一个一站式供应商,满足您在miRNA纯化、定量和功能鉴定上的所有需求。

microRNA(miRNA)是天然存在、长约22个核苷酸的非编码RNA,它们介导了转录后的基因调控。miRNA在许多生物过程中扮演了重要角色,包括分化和发育、细胞信号通路以及对感染的反应。大量的证据表明,miRNA表达的失调是一些疾病过程(包括许多癌症)的起因或指示剂。研究还发现血清和血浆中可以检测到循环miRNA,且它们的表达因疾病而异,这一发现说明循环miRNA的表达特征可作为疾病诊断和预防的生物标志物,具有巨大潜力。

miRNA研究的成功依赖于高性能工具和技术的使用。QIAGEN是一个一站式供应商,满足您在miRNA纯化定量功能鉴定上的所有需求。欢迎访问QIAGEN的GeneGlobe® 网页(www.qiagen.com/GeneGlobe),订购miRNA特异的产品,并发现大量宝贵的基因信息、通路信息和生物信息学工具。

新一代的miScript PCR System利用基于SYBR® Green的实时定量PCR,实现了灵敏且特异的miRNA定量和表达谱分析。miScript miRNA PCR Arrays能够快速分析多个物种的整个miRNA组,或通路聚焦的成熟miRNA。此外,通过GeneGlobe网页可订购成熟miRNA、前体miRNA及其他非编码小RNA(ncRNA)的单个分析

miScript PCR System实现了:
 灵敏的成熟miRNA表达谱分析,利用miRNA组和通路聚焦的PCR阵列
 无以伦比的灵活性,可定量同一cDNA样品中的成熟miRNA、前体miRNA、ncRNA和mRNA
 免费、易于使用的数据分析工具,适用于miScript miRNA PCR Arrays

一个系统,满足您所有的miRNA定量需求

可靠的miScript PCR System覆盖了miRNA定量的所有步骤,从RNA转化成cDNA,到miRNA的实时定量PCR检测和简单的数据分析。下面将详细介绍miScript PCR System的组分。

miScript II RT Kit

miScript II RT Kit可用于开展一步法、单管的逆转录反应。双缓冲液系统的开发是为了便于成熟miRNA的快速表达谱分析,以及利用实时定量PCR对所有RNA种类的灵活定量。

miScript HiSpec Buffer促进成熟miRNA向cDNA的选择性转化。这实现了成熟miRNA的快速表达谱分析,而几乎无背景信号。miScript HiFlex Buffer促进了所有RNA种类(成熟miRNA、前体miRNA、非编码RNA和mRNA)向cDNA的转化。这实现了无以伦比的灵活性,可研究单个cDNA样品中的miRNA生物发生以及全基因组范围的miRNA和mRNA调控。

miScript SYBR Green PCR Kit

miScript SYBR Green PCR Kit包含QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix和miScript Universal Primer,后者是一个PCR反向引物,与miScript Primer Assays(成熟miRNA特异的正向引物)联合使用可检测成熟miRNA。此试剂盒经过优化,实现了成熟miRNA的高质量检测(定量PCR法)。

miScript Primer Assays和miScript Precursor Assays

miScript Primer Assays是成熟miRNA特异的正向引物。与miScript Universal Primer(反向引物)联合使用,miScript Primer Assays实现了成熟miRNA的特异检测。miScript Precursor Assays是前体miRNA特异的正向和反向引物对,实现了前体miRNA茎环结构的特异定量。所有分析都是利用miRBase的最新序列信息设计的,可在GeneGlobe网页上查找(www.qiagen.com/GeneGlobe)。

miScript miRNA PCR Arrays

前沿的miScript miRNA PCR Arrays 包含了成熟miRNA特异的正向引物(miScript Primer Assays),这些引物排布在miRNA组分析板以及生物学相关、通路聚焦的分析板上。与miScript SYBR Green PCR Kit联合使用,miScript miRNA PCR Arrays实现了快速、特异且重复的成熟miRNA表达谱分析。您可以对结果充满信心,因为miScript miRNA PCR Array中的每个分析都经过广泛的实验室验证,确保能灵敏特异地检测成熟miRNA。

miScript PCR Controls

miScript PCR Controls是引物,可对miRNA定量研究(使用miScript PCR System)的定量PCR结果进行标准化。miScript PCR Controls目前有6种,分别适合5个snoRNA和1个snRNA。这些对照可用于人、小鼠、大鼠、狗和恒河猴的标准化研究。

miScript miRNA PCR Array 数据分析工具

我们为miScript miRNA PCR Array提供了免费、易用的数据分析软件。每个miScript miRNA PCR Array都带有内容特异的数据分析工具。只要上传原始的CT值,分析工具就会自动解释PCR阵列的对照,利用ΔΔCT法开展相对定量,并以多种格式呈现结果,让您能够快速阐释数据。

前沿的miRNA表达谱分析工具

利用miScript miRNA PCR Arrays开展miRNA表达谱分析

miScript miRNA PCR Arrays是成熟miRNA特异的正向引物(miScript Primer Assays),这些引物排布在miRNA组以及生物学相关、通路聚焦的分析板上。这些PCR阵列是以即用的384孔板、96孔板和100孔Rotor-Disc® 形式提供的。目前有多个物种的miScript miRNA PCR Arrays可供选择,确保了高性能,且完全可定制。每个阵列包含的对照实现了整个实验的监控,从样品制备到数据分析。这些对照包含了数据标准化对照、逆转录对照和PCR对照。miScript miRNA PCR Array中的每个分析都经过实验室验证,确保能通过定量PCR灵敏特异地检测成熟miRNA。

简明、快速的流程

通过miScript miRNA PCR Arrays 开展miRNA表达谱分析既简单、又可靠。首先,利用miScript II RT Kit 和miScript HiSpec Buffer 制备cDNA。其次,将cDNA、miScript Universal Primer、QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix 以及无RNA酶的水的预混液加入miScript miRNA PCR Array中。第三,在实时定量PCR仪中运行反应。最后,利用miScript miRNA PCR Array数据分析工具分析数据。与终端用户合力打造,miScript miRNA PCR Arrays 始终保持在基于定量PCR的成熟miRNA表达谱分析工具的前沿。

发现血清或血浆样品中的miRNA生物标志物

通路聚焦的miScript miRNA PCR Arrays 的范围还在不断扩大,以便发现miRNA在生物过程中的新作用。miScript miRNA PCR Arrays 的内容是根据我们独有的方法挑选的,它确保阵列内容保持最新且生物学相关。目前miRNA研究中最让人激动的领域之一是对血清或血浆样品中miRNA的评估。血清和血浆中相对稳定的细胞外miRNA的存在引发了极大的兴趣,因为这些miRNA水平的改变有可能作为多种疾病的非侵入性生物标志物。因此,我们开发了Serum & Plasma miScript miRNA PCR Array,实现血清和血浆中84种与疾病最相关的miRNA的快速分析。

释放FFPE样品中的miRNA表达数据

福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)组织样品是样品材料的宝贵来源,可供追溯性的miRNA表达谱分析之用。QIAGEN为FFPE样品分析提供了一个完整的方案。miRNeasy FFPE Kit实现了总RNA的纯化,且产量和性能均优于其他的miRNA纯化方法,如酚氯仿抽提法。随后miScript miRNA PCR Arrays可释放FFPE样品中宝贵的miRNA数据。

在您的模式系统中实现最大程度的miRNA表达谱分析

除了通路聚焦的阵列,我们还提供最新的miRNome miScript miRNA PCR Arrays,适合多个物种,包括人、小鼠、大鼠、狗和恒河猴。只需要不到1 μg总RNA,整个人miRNA组的表达谱即可快速获得。

简化您的实时定量PCR数据分析

每个miScript miRNA PCR Array都带有免费的在线数据分析工具。数据分析工具以网页形式和Excel® 形式提供,可利用ΔΔCT法自动开展相对定量。

miScript miRNA PCR Array数据分析工具自动:
 解释对照孔
 利用ΔΔCT法计算倍数改变
 以多个形式呈现结果

索取miRNA定量产品的更多资料

(原文由QIAGEN提供,生物通负责编译和整理)

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