■ 凋亡早期检测:
细胞膜的重排发生在凋亡的早期。在许多凋亡细胞中,这种重排导致磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。这一事件可通过Annexin V的染色来检测。Annexin V是一种Ca 2+依赖的磷脂结合蛋白,在Ca 2+存在的情况下,与PS有很高的亲和力,可与凋亡细胞膜上外翻的PS相结合。
早期凋亡检测的新工具
特征: – 细胞膜改变,磷脂酰丝氨酸外翻 – 起始caspase被激活(如caspase-8、caspase-9) – 线粒体发生改变
■ 凋亡中期检测 :
Caspase是一组天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶,它们在凋亡中发挥重要作用。市场上有很多caspase检测试剂盒,来检测多种caspase的活性。我们既可以通过荧光标记的底物来检测有活性的caspase,也可以利用荧光标记的caspase抑制剂来标记。你还可以通过免疫组化分析来检测切割的底物如PARP。当然,现在还有一些与众不同的新品……
凋亡聚焦:Caspase检测新品
特征: – 效应caspase被激活(如Caspase-3、Caspase-7) – 细胞内的一些蛋白(死亡底物)被caspases 切割
■ 凋亡晚期检测 :
TUNEL技术的原理是染色体DNA断裂时产生大量的粘性3'-OH末端,而生物素或荧光素标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下掺入到DNA的3'-末端,并通过一定的显色系统使之显示出来。这种方法较电泳法来说更为灵敏,荧光显微镜能检测到单个细胞,流式细胞仪也能检测约100个细胞。市场上的TUNEL分析有很多种,究竟如何选择,且听本文分解。
凋亡聚焦:选择合适的TUNEL分析
特征: – DNA 断裂 – 形成凋亡小体 – 凋亡小体被吞噬细胞吞噬
■ In Vivo凋亡检测:
目前市场上凋亡检测的产品真不少,但大多数是针对细胞。若想开展in vivo的凋亡检测,自然要花费一番功夫寻找产品。生物通小编为你搜罗了几个。
凋亡聚焦:in vivo凋亡检测
■ 延伸阅读:
形形色色的凋亡检测 凋亡检测之默克篇 凋亡检测之Promega篇 在合适的时间点检测凋亡(上) 在合适的时间点检测凋亡(下)
为了方便凋亡研究人员更清楚地了解凋亡的机制和实验操作,默克密理博特别推出了凋亡研究实用工具手册(中文版)。本手册作为凋亡的研究指南,为广大研究者提供了各种研究工具及技巧提示。欢迎索取>>