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NanoDrop新应用——用NanoDrop进行小分子药物的质控
【字体: 大 中 小 】 时间:2014年03月21日 来源:
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为了保障病人能够安全有效地用药,小分子药物出厂前进行质控是必需的。在药品生产线上对一批药品进行抽样质控时,Thermo Scientific NanoDrop2000分光光度计能提供快速且低成本的检测技术。基于紫外吸收的原理,NanoDrop可检测多种化合物的浓度,还可以通过光谱图进行样本纯度的监测。
在本次研究中,用NanoDrop2000进行数个扑热息痛(acetaminophen)样品的紫外吸收检测,并将不同来源的待测样品与标准品进行比较。另外,我们还评估了样品检测的重复性,以及在未知的样本中,聚合物和光散射可能带来的影响。
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因为NanoDrop2000的光程可以进行自动调整(如图1所示),所以比起常规的比色杯检测来说,NanoDrop2000可以进行更宽浓度范围的药物样品定量。由于NanoDrop2000能出色地自动调节光程(光程范围从1.0mm到0.05mm),所以可以更精确地进行样本的测定,其动态范围约为常规比色杯的300倍。
实验过程
每个待测的样本都按美国药典规定进行检测:未知浓度的扑热息痛样品在244nm波长下得到吸收值,再与扑热息痛标准品建立的标准曲线比较,进行浓度的定量。扑热息痛标准品的纯度≥ 99.9%。在实验之前,必须确认一下该扑热息痛样品的*高吸收峰是否在244nm处(如图2所示)。
一共检测了6个未知的扑热息痛样品,每个样品都溶于100ml的去离子水中,在室温,约100rpm震荡下孵育4小时,使溶液终浓度约为5mg/ml。
6mg/ml扑热息痛标准品的制备:将600mg的扑热息痛(Sigma-Aldrich, A7085)溶解于100ml的去离子水中。将标准品稀释一系列浓度梯度进行标准曲线的构建。每个浓度的标准品取1ul,用NanoDrop2000紫外分光光度计检测244nm波长下的吸收值,并做三次重复。通过整体的标准曲线我们可以看到,吸收值和浓度之间形成的线性关系(如图3所示)。将待测的扑热息痛样品吸收值与标准曲线进行比较,判断样品的浓度,并计算样品的原始浓度。
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结果:
每个扑热息痛样本分别稀释成三份独立的待测样本,每个待测样本检测时做三次重复。结果表1所示,检测的重复性非常好;所有检测的CV值均小于1%。
待测扑热息痛样品的吸收光谱图(如图4所示)几乎与标准品的光谱图(如图2所示)是一致的。
结论
从扑热息痛药品浓度和244nm吸收值形成的线性关系来看,用分光光度计进行一批药品浓度的确定是一种非常理想的方法。由本次实验的结果可见,Thermo Scientific NanoDrop2000分光光度计能快速精确进行药品生产线上的质控抽查。因为仪器能够自动地进行光程调整,所以能大大地减少样本稀释的需求。全光谱图的数据还能为各种药品提供非常完美和直观的纯度信息。但如果使用传统的比色杯分光光度计检测的话,大多数待测样品都需要进行稀释,以保证不超出仪器的检测范围。这无形之中就大大增加了检测的工作量,并且稀释的过程不可避免地会增加误差的风险。而且NanoDrop2000使用方便,检测周期短,也大大地缩短了质控工作的时间,这使药品生产过程中进行多种样品的质控成为可能。
参考文献
1. United States Pharmacopeia and Natural Formulary (USP 29 NF 24). Supplement No. 2. Rockville, MD: United States Pharmacopeia Convention; 2006: 3711
延伸阅读:
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